抗T-2毒素和脱氧雪腐镰刀烯醇毒素的抗体制备和T-2毒素酶联免疫分析检测方法的建立

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单端孢霉烯族类毒素普遍存在于自然界中，主要由真菌产生。粮食在收获，运输，储存中被此类毒素污染的机率很高，带来了不可忽略的食品安全隐患。因此，建立一种方便、快速、可靠的检测方法来检测食品及谷物中毒素的含量是非常必要的。本研究的两种毒素T-2及DON(deoxynivalenol)毒素，分别是单端孢霉烯族类毒素A类和B类中重要的毒素，本文诣在建立其以ELISA为主的免疫学检测方法。
　　 (1)从禾谷镰刀菌的大米发酵产物中分离纯化到纯度为97.7％的DON毒素，将高速逆流色谱与高效液相色谱法有效地结合，从300g大米发酵产物中获得8mgDON毒素，用于和载体蛋白偶联。
　　 (2)通过DMAP(dimethylamiopryidine)催化法，合成了T-2-HS，通过碳二亚胺法与载体蛋白结合得到3种完全抗原，分别为T-2-HS-BSA，T-2-HS-OVA，T-2-HS-KLH，质谱鉴定其中的T-2-HS-BSA的偶联比为2.63。以T-2-HS-BSA免疫小鼠获得了高效价的抗T-2毒素多克隆抗体，建立了T-2毒素的间接竞争酶联免疫吸附检测方法。条件为：以20μg/mL的T-2-HS-KLH为包被原，封闭液为0.5%的卵清蛋白，多克隆抗体为一抗，标准品T-2毒素为竞争毒素。该方法的检测限为0.12μg/mL，线性范围0.28-30.84μg/mL，IC50值为1.45μg/mL，样品加标回收率为92.0%-104.6%，变异系数为15.1%-34.0%。
　　 (3)采用DMAP催化法，成功将DON的三个羟基位点乙酰化，并成功合成了混合免疫原DON-(HS)n-BSA及包被原DON-(HS)n-KLH，质谱结果显示免疫原的偶联效果较佳，免疫动物后获得了抗DON的多克隆抗体。

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作者
洪淑娟;
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作者单位

华中农业大学;

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授予单位华中农业大学;
学科微生物学
授予学位硕士
导师姓名张吉斌;
年度 2011
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类食品污染度的测定;
关键词
T-2毒素; 脱氧雪腐镰刀菌烯醇; 抗体制备; 免疫学检测; 多克隆抗体;

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