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大鼠乳腺肿瘤病理学观察与肿瘤细胞系的建立及生物学特性研究

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第一章文献综述

1实验动物与肿瘤研究

1.1实验动物概述

1.2常用实验大鼠自发乳腺肿瘤的生物学特性

1.3乳腺肿瘤动物模型

2肿瘤发病学

2.1 Bcl-2基因与肿瘤

2.2 P53基因与肿瘤

2.3 Bcl-2基因与P53基因的关系

3细胞培养及其在肿瘤研究中的应用

3.1肿瘤细胞培养

3.2肿瘤细胞系的建立

3.3肿瘤细胞系生物学检测

3.4细胞培养在肿瘤研究中的应用

4研究的目的和意义

第二章SPF级大鼠自发性乳腺肿瘤流行病学与病理学特点

1材料与方法

1.1实验动物

1.2主要仪器

1.3实验方法

1.4肿瘤组织学分类方法

2结果

2.1流行病学表现

2.2 临床表现

2.3组织病理学

3讨论

第三章大鼠自发性乳腺肿瘤组织中p53、Bcl-2蛋白的表达

1材料与方法

1.1材料

1.2试剂

1.3方法

1.4结果判定

2结果

3讨论

第四章Wistar大鼠乳腺肿瘤细胞系的建立及其生物学特性研究

1材料与方法

1.1实验用主要仪器和耗材

1.2主要试剂配制

1.3乳腺肿瘤患鼠基本资料

1.4肿瘤细胞原代培养

1.5细胞传代培养

1.6细胞冻存与复苏

1.7细胞的鉴定

2结果与分析

2.1细胞生长曲线

2.2细胞形态学观察

2.3染色体分析结果

2.4免疫组化染色

2.5软琼脂集落形成率

2.6异种动物接种试验

3讨论

小结

参考文献

在校期间发表的学术论文

致谢

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摘要

本文于2005年8月至2006年5月对武汉市内SPF级大鼠生产单位的SD大鼠、Wistar大鼠进行了为期9个月的调查研究,共收集到33口、大鼠自发乳腺肿瘤病例。对SPF级大鼠生产群进行病理组织学研究,并依据相应的分类标准进行分类。SD大鼠自发乳腺肿瘤发生率为10.5%(21/200),其中良性肿瘤为8.5%(1.7/200),恶性肿瘤为2.0%(4/200);Wistar大鼠乳腺自发肿瘤发生率为2.0%(12/600),其中良性肿瘤为1.5%(9/600),恶性肿瘤为0.5%(3/600)。SD大鼠、Wistar大鼠乳腺良性肿瘤自发率均高于恶性肿瘤,并以纤维腺瘤和乳腺腺瘤最为多见。 肿瘤的发生、发展是多种基因参与的复杂过程,不仅与癌基因的异常激活和肿瘤抑制基因的失活相关,也与细胞凋亡密切相关。野生型p53基因对细胞的增殖和分化起负调控作用,突变型p53基因失去了野生型的正常功能,具有癌基因的特性。Bcl-2是细胞凋亡的调控基因,其基因的异常可以阻止细胞的凋亡,导致肿瘤发生。作者应用免疫组织化学SABC法同步检测大鼠乳腺肿瘤标本中p53、Bcl-2蛋白的表达情况。结果显示,p53在大鼠乳腺良性肿瘤中表达率为46.1%(12/26),在大鼠乳腺癌中表达率为85.7%(6/7),p53蛋白随着肿瘤恶性程度增高阳性率升高,p53蛋白表达与肿瘤的恶性程度呈正相关,与其在人体恶性肿瘤中的意义相似。Bcl-2在大鼠乳腺良性肿瘤中表达率为26.9%(7/26),在大鼠乳腺癌中表达率为57.1%(4/7)。随着向癌变发展,Bcl-2表达有逐渐增高的趋势。11例Bcl-2表达阳性肿瘤中p53突变率为81.8%(9/11),22例Bcl-2表达阴性肿瘤中p53突变率为40.9%(9/22)。p53蛋白与Bcl-2蛋白均有较高频率的阳性表达,提示此两种基因蛋白可能协同导致乳癌的发生发展。 从上述大鼠自发性乳腺癌组织中分离并建立了一株乳腺肿瘤细胞系ZHL2006,并对其生物学特性进行了鉴定。ZHL2006细胞在体外生长迅速,群体倍增时间为43.6h;倒置相差显微镜及Giemsa染色镜下观察细胞为多边形及梭形;透射电镜观察可见细胞表面有微绒毛,核高度不规则,核浆比例增大,核仁明显等;染色体数目和结构异常;广谱细胞角蛋白(PCK)染色阳性,说明其自上皮而非来自基质;同时ZHL2006细胞系在软琼脂中可形成克隆,具裸鼠致瘤性。该乳腺肿瘤细胞系经体外长期培养后已形成永生化细胞系,具有明显的恶性细胞表型。

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