DNA等温扩增检测副溶血性弧菌的新技术研究

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近年来，新发展起来的核酸扩增技术已广泛应用于生命科学及其相关的各个领域，对生命科学的发展发挥着重要的作用。由于聚合酶链式反应需要反复的热变性，依赖于特定的热循环仪，从而使其应用范围受到了一定的限制。因此，建立简便快速、灵敏、准确的等温核酸扩增技术对核酸的体外扩增检测具有非常重要的意义，并在临床和现场快速诊断中具有良好的应用前景。
　　本文构建了两种简单、快速、灵敏检测DNA的等温核酸扩增新方法。基于邻近效应原理在等温条件下构建了DNA检测的新方法。首先，设计了两种实验方案，并对方案进行了优化。以副溶血性弧菌的特征序列为检测靶标，对实验方案进行了优化设计，并对引物的长度和浓度等条件进行优化。在最优条件下对不同浓度的靶标DNA进行检测，最低可以检测到0.1 fmol，且靶标含量在100 fmol-0.1 fmol的范围内，荧光信号的POI值与靶标浓度呈良好的线性关系。该检测方法操作简单，反应迅速、对仪器的依赖性低。构建了一种基于荧光探针检测双链DNA的新方法。该方法首先借助切刻内切酶与聚合酶的联合作用，在靶标双链DNA上引发线性链置换扩增，将双链DNA转化为单链。然后利用设计的双链荧光探针作为引物在单链DNA上引发后续反应，最终实现信号的级联放大。该方法以大肠杆菌pBluescript II KS(+)（PBS）质粒作为检测对象，最低可以检测到2.3 amol的PBS质粒；且该方法具有较强的特异性，即使双链荧光探针中只含有一个碱基错配也能将其有效的区分；为了检验该方法在实际样品中的应用，在复杂体系下对靶标进行检测，结果表明该方法具有较强的抗干扰能力。基于该方法具有简单快速、特异性高、抗干扰能力强等优点，可为海产养殖中致病微生物，如副溶血性弧菌、霍乱弧菌等致病菌的检测提供一个新的平台。

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作者
潘美;
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作者单位

青岛科技大学;

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授予单位青岛科技大学;
学科海洋化学
授予学位硕士
导师姓名马翠萍;
年度 2016
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类细菌纲;生物化学技术;
关键词
溶血性弧菌; 微生物鉴定; 分子信标; 荧光探针;

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