具有高降粘活性的生产木质纤维素乙醇的酿酒酵母工业菌株的开发

声明

第一章 文献综述

1.1 木质纤维素乙醇概述

1.1.1 木质纤维素

1.1.2 纤维素乙醇生产工艺概述

1.2 纤维素酶概述

1.2.1 纤维素酶来源

1.2.2 内切葡聚糖酶

1.2.3 β-葡萄糖苷酶

1.2.4 外切葡聚糖酶

1.2.5 纤维素酶系的协同作用

1.2.6 纤维素酶解影响因素

1.3 酿酒酵母概述

1.3.1 酿酒酵母简介

1.3.2 酿酒酵母的遗传转化

1.4 纤维素酶在酿酒酵母中的表达研究进展

1.4.1 纤维素酶基因在酿酒酵母中表达的影响因素

1.4.2β-葡萄糖苷酶基因在酿酒酵母中的表达

1.4.3 内切葡聚糖酶基因在酿酒酵母中的表达

1.4.4 多种纤维素酶基因在酿酒酵母中的表达

1.5 研究目的和意义、内容和技术路线

1.5.1 研究目的和意义

1.5.2 研究内容

1.5.3 技术路线

第二章 材料与方法

2.1实验材料

2.1.1质粒和菌株

2.1.2主要实验仪器

2.1.3主要试剂

2.1.4培养基

2.1.5主要溶液

2.2 实验方法

2.2.1微生物培养

2.2.2 碱法小量提取大肠杆菌质粒

2.2.3酿酒酵母染色体快速分离提取

2.2.4酿酒酵母转化

2.2.5 琼脂糖凝胶电泳

2.2.6. PCR反应

2.2.7 内切葡聚糖酶活性测定

2.2.8β-葡萄糖苷酶酶活测定

2.2.9 粘度测定

2.2.10木质纤维素预处理

2.2.11 木质纤维素组分含量测定

2.2.12. 发酵实验

2.2.13 HPLC测定发酵液组分

第三章 整合纤维素内切酶工业酿酒酵母的研究

3.1 整合纤维素内切酶基因酿酒酵母工业菌株的构建及初步评价

3.1.1转化和筛选

3.1.2生长曲线的测定

3.1.3内切酶酶活及酶活稳定性的测定

3.1.4蛋白电泳

3.1.5 工业菌株降解羧甲基纤维素的评价

3.2工业菌株利用木质纤维素预处理物的发酵产醇评价

3.2.1木质纤维素预处理

3.2.2 纤维素酶的酶活测定

3.2.3工业菌株利用木质纤维素预处理物的发酵产醇评价

3.2.4工业菌株利用木质纤维素预处理物的降粘效果评价

3.4 本章小结

第四章 整合纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶双基因工业酿酒酵母的研究

4.1 整合纤维素内切酶和 β-葡萄糖苷酶双基因酿酒酵母工业菌株的构建

4.1.1以Angle α为出发菌株整合纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶双基因酿酒酵母工业菌株的构建

4.1.2以Angle BG3为出发菌株整合纤维素内切酶基因酿酒酵母工业菌株的构建

4.2 重组菌株的评价

4.2.1 生长曲线的测定

4.2.2 内切葡聚糖酶活性的测定

4.2.3β-葡萄糖苷酶酶活曲线的测定

4.2.4 利用预处理木质纤维素的发酵产醇评价

4.4 本章小结

第五章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

参考文献

附录

致谢