声明
第1章 文献综述
1.1 柑橘黄龙病概述
1.1.1 病原的发现与分类
1.1.2 病原的分子特性
1.1.3 寄主感病症状
1.1.4 病原的传播方式及宿主范围
1.1.5 防控技术
1.2 黄龙病菌分泌系统和假定效应子研究进展
1.2.1 分泌系统
1.2.2 效应蛋白
第2章 引言
第3章 柑橘黄龙病菌效应蛋白Clsp33生物信息学与分泌特性研究
3.1 实验材料
3.1.1 供试毒源和苗木
3.1.2 菌株和载体
3.1.3 主要试剂（盒）
3.1.4 主要存储液配制
3.1.5 主要仪器
3.2. 实验方法
3.2.1 生物信息学分析
3.2.2 引物设计
3.2.3 T载体构建
3.2.4 构建原核表达载体
3.2.5 转化BL21进行原核表达
3.2.6 总RNA提取
3.2.7 cDNA合成和qPCR分析
3.3 结果与分析
3.3.1 生物信息学分析
3.3.2 编码基因Clsp33和phoA的T载体构建
3.3.3 原核表达载体构建
3.3.4 BL21原核表达验证
3.3.5 Clsp33在宿主甜橙和木虱中差异表达
3.4 讨论
3.5 小结
第4章 效应蛋白Clsp33亚细胞定位及生物学功能分析
4.1 实验材料
4.1.1 供试苗木
4.1.2 菌株和载体
4.1.3 主要试剂（盒）
4.1.4 主要存储液配制
4.1.5 主要仪器和材料
4.2 实验方法
4.2.1 锌指结构预测
4.2.2 核定位信号预测
4.2.3 引物设计
4.2.4 植物表达载体构建
4.2.5 农杆菌感受态制备
4.2.6 农杆菌转化
4.2.7 农杆菌注射
4.2.8 亚细胞定位
4.2.9 Northern blot
4.3 结果与分析
4.3.1 核定位信号突变对Clsp33亚细胞定位的影响
4.3.2 核定位信号突变对Clsp33致病性的影响
4.3.3 高温能影响Clsp33的亚细胞定位
4.3.4 Clsp33致病性与其进核数量相关
4.3.5 锌指结构突变不影响Clsp33致病性
4.4 讨论
4.5 小结
第5章 效应蛋白Clsp33在甜橙寄主中互作蛋白的筛选
5.1 实验材料
5.1.1 供试苗木
5.1.2 菌株和载体
5.1.3 主要试剂
5.1.4 主要储存液配置
5.1.5 主要仪器
5.2. 实验方法
5.2.1 引物设计
5.2.2 载体构建
5.2.3 酵母AH109感受态的制备
5.2.4 转化
5.2.5 利用β-半乳糖苷酶鉴定酵母互作
5.2.6 BiFC验证蛋白互作
5.3 结果与分析
5.3.1 Clsp33与拟南芥PINP1在酵母中互作
5.3.2 Clsp33与甜橙CsPINP1在酵母中有弱互作
5.3.3 Clsp33与甜橙CsPINP1在植物中有互作
5.4 讨论
5.5 小结
第6章 主要结论、创新点与展望
6.1 主要结论
6.1.1 Clsp33的生物信息学分析和分泌特性验证
6.1.2 Clsp33的亚细胞定位和生物学功能分析
6.1.3 Clsp33在甜橙寄主中互作蛋白的筛选
6.2 创新点
6.3 展望
参考文献
附录 缩略词与中英文对照表
在读期间发表论文及参加科研项目情况
致谢
