柔嫩艾美耳球虫表面抗原EtSAG4、EtSAG16和EtSAG22的免疫保护效果研究

论文说明

声明

摘要

缩略表

1 文献综述

1．1 鸡球虫病和鸡球虫

1．2 鸡球虫的分离、鉴定和纯化技术

1．2．1 鸡球虫的分离技术

1．2．2 鸡球虫的鉴定方法

1．2．3 鸡球虫单卵囊纯化技术

1．3 RAPD在鸡球虫遗传多态性研究中的应用

1．4 鸡球虫生活周期表达不同抗原研究进展

1．4．1 鸡球虫各生活周期分泌的抗原物质

1．4．2 鸡球虫表面抗原的研究进展

1．5 鸡球虫感染免疫应答研究进展

1．5．1 细胞免疫

1．5．2 体液免疫

1．5．3 细胞因子的作用

1．6 鸡球虫疫苗研究进展

1．6．1 活疫苗

1．6．2 基因工程疫苗

1．6．3 活载体疫苗

2．1 前言

2．2 实验材料

2．2．1 实验动物和球虫样品

2．2．3 RAPD分析的随机引物

2．2．4 主要仪器和试剂

2．2．5 主要溶液的配制

2．3．1 粪便中球虫卵囊的收集

2．3．2 球虫卵囊孢子化

2．3．3 球虫卵囊计数

2．3．4 E．tenalla虫株单卵囊纯化和增殖

2．3．5 球虫基因组的提取

2．3．7 E．tenalla野生株RAPD分析

2．4 结果与分析

2．4．2 E．tenella野生株ITS1特异性鉴定

2．4．3 E．tenella虫株ITS1序列同源性比对

2．4．4 球虫ITS1系统进化分析

2．4．5 E．tenalla野生株RAPD多态性扩增结果和遗传多态性分析

2．5 讨论

3 E．tenalla表面抗原基因EtSAG4、EtSAG16和EtSAG22克隆和原核表达

3．1 前言

3．2 材料和方法

3．2．1 实验动物和虫株

3．2．2 实验所需要的引物

3．2．3 主要仪器和试剂

3．2．4 主要培养基和溶液的配制

3．2．5 菌株和质粒

3．3 实验方法

3．3．2 表面抗原基因EtSAG4、EtSAG16和EtSAG22的克隆

3．3．3 重组原核表达质粒的构建

3．3．4 大肠杆菌感受态细胞的制备及连接产物的转化

3．3．5 质粒的鉴定及测序

3．3．6 碱裂解法小量提取质粒

3．3．7 EtSAG4、EtSAG16、EtSAG22和EtSAG41622蛋白表达

3．3．8 E．tenella多克隆抗体的制备

3．3．9 Western blot

3．4 结果与分析

3．4．1 EtSAG4、EtSAG16和EtSAG22编码基因的克隆和分析

3．4．2 重组原核表达质粒的构建和鉴定

3．4．3 EtSAG4、EtSAG16、EtSAG22和EtSAG41622的原核表达

3．4．4 检测EtSAG4、EtSAG16、EtSAG22和EtSAG41622蛋白表达

3．5 讨论

4 EtSAG4、EtSAG16和EtSAG22的真核表达

4．1 前言

4．2 实验材料

4．2．1 球虫虫株和细胞

4．2．2 实验所需要的引物

4．2．3 主要仪器和试剂

4．2．4 主要培养基和溶液的配制

4．2．5 菌株和质粒

4．3 实验方法

4．3．1 重组真核表达质粒的构建

4．3．2 大肠杆菌感受态细胞的制备及连接产物的转化

4．3．3 质粒的鉴定及测序

4．3．4 碱裂解法小量提取质粒

4．3．5 去内毒素重组真核质粒的大量提取

4．3．6 哺乳动物细胞的培养和转染

4．4 结果与分析

4．4．1 EtSAG4、EtSAG16和EtSAG22部分编码序列的PCR扩增

4．4．2 重组真核表达质粒的构建和鉴定

4．4．3 重组真核表达质粒在293T细胞中表达

4．4．4 RT-PCR方法验证重组真核表达质粒在293T细胞中的表达

4．4．5 Western blot验证重组真核表达质粒在293T细胞中的表达

4．5 讨论

5 EtSAG4、EtSAG16、EtSAG22和EtSAG41622的免疫保护性实验

5．1 前言

5．2 实验材料

5．2．1 实验动物和球虫虫株

5．2．2 主要仪器和试剂

5．2．3 主要培养基和溶液的配制

5．2．4 菌株和质粒

5．3 实验方法

5．3．3 动物实验

5．4 结果与分析

5．4．1 实验动物血液细胞因子浓度和IgY浓度测定

5．4．2 试验动物增重和相对增重率

5．4．3 实验动物病变计分、克粪便卵囊产量和卵囊产量下降率

5．4．4 动物实验抗球虫指数

5．5 讨论

结论

参考文献

致谢