棉花体细胞胚胎发生相关基因GhL1L1的克隆和功能验证

声明

摘要

缩略词表

1 文献综述

1．1 植物的胚胎发育及体细胞胚胎发生

1．2 激素对体细胞胚胎发生的影响

1．2．1 生长素

1．2．2 细胞分裂素

1．2．3 脱落酸

1．2．4 乙烯

1．3 影响体细胞胚胎发生的其他因素

1．3．1 多胺

1．3．2 硫氧还蛋白

1．3．3 表观调控

1．4 棉花体细胞胚胎发生的研究进展

1．5 LEC基因的研究进展

1．5．1 LEC基因的概述

1．5．2 LEC基因参与表观调控影响植物的生长发育

1．5．3 LEC基因调控胚胎发生

1．5．4 LEC基因调控种子中脂肪酸的合成

1．6 本研究的目的和意义

2 材料和方法

2．1 实验材料

2．1．1 植物材料

2．1．2 载体和菌株

2．2 实验方法

2．2．3 载体的构建及转基因

2．2．4 DNA的提取和Southern杂交

2．2．5 RNA的提取，Northern杂交和qRT-PCR表达分析

2．2．6 愈伤增殖率(CPR)和胚性愈伤的分化率(EDR)的统计

2．2．7 内源生长素含量测定

2．2．8 脂肪酸含量的测定

2．2．9 GUS定性和定量检测

2．2．10 组织化学观察

2．2．11 酵母单杂交(Y1H)点对点验证

2．2．12 原生质体的分离和双荧光素酶报告基因检测系统实验

2．2．13 酵母双杂交(Y2H)

2．2．14 Pull-down体外验证蛋白质相互作用

2．2．15 免疫沉淀质谱分析(IP-MS)鉴定互作蛋白

2．2．16 双分子荧光互补实验和蛋白共定位及亚细胞定位实验

2．2．17 Co-IP(Co-Immunoprecipitation)体内验证蛋白质相互作用

3 结果与分析

3．1．1 陆地棉GhL1L1进化分析

3．1．2 GhL1L1的表达分析

3．1．3 陆地棉GhL1L1超量表达载体和干涉表达载体转化棉花

3．2 GhL1L1调控棉花的体细胞胚胎发生

3．2．1 超表达GhL1L1抑制体细胞胚胎发生过程中愈伤组织的增殖

3．2．2 GhL1L1影响胚性愈伤组织的产生

3．2．3 GhL1L1影响棉花体细胞胚胎发生过程中生长素的积累和分布

3．2．4 酵母单杂交和LUC检测系统实验验证GhL1L1调控GhPP2AA2的表达

3．2．5 体外和体内实验验证GhPP2AA2蛋白与GhPIN1蛋白的相互作用

3．2．6 生长素运输抑制剂TIBA促进体细胞胚胎发生进程

3．3 GhL1L1调控棉花脂肪酸合成

3．3．1 GhL1L1转基因棉花脂肪酸含量的测定

3．3．2 酵母双杂交和IP-MS筛选GhL1L1的互作蛋白

3．3．3 体内和体外实验验证GhL1L1与NF-YC蛋白的相互作用

4 讨论

4．1 体细胞胚胎发生伴随着复杂的生长素动态变化

4．2 GhL1L1在陆地棉中的同源基因和进化分析

4．3 GhL1L1与生长素的极性分布

4．4 GhL1L1与脂肪酸的合成

4．5 GhL1L1在胚胎发育过程中存在复杂的调控关系

参考文献

附录

攻读学位期间已发表和待发表论文

致谢