吸血过程对全沟硬蜱基因表达及其微生物群落影响

声明

摘要

第一章 前言

1．1 蜱虫

1．1．1 软蜱

1．1．2 硬蜱

1．1．3 全沟硬蜱

1．2 硬蜱吸血策略

1．3 蜱虫生理生化与吸血过程

1．3．1 中肠与血餐消化

1．3．2 唾液腺、唾液与血餐摄取

1．4 病原菌传播与吸血过程

1．4．1 主要蜱传疾病

1．4．2 共生菌

1．4．3 病原菌传播与吸血过程

1．5 研究目的与意义

第二章 常用仪器、试剂及方法

2．1 常用仪器与试剂

2．1．1 常用仪器

2．1．2 常用试剂

2．2 常用试剂配制

2．2．1 培养基配制

2．2．2 抗生素配制

2．2．3 SDS-PAGE相关试剂配制

2．2．4 Western blot相关试剂配制

2．2．5 其他试剂配制

2．3 常用方法

2．3．1 酶切反应

2．3．2 载体连接

2．3．3 琼脂糖凝胶回收

2．3．4 质粒抽提

2．3．5 CaCl2法制备TG1感受态细胞

2．3．6 质粒DNA热激转化TG1感受态细胞

2．3．7 SDS-PAGE

2．3．8 Western Blot

2．3．9 多克隆抗体制备

2．3．10 间接免疫荧光(IFA)

2．3．11 莱姆病螺旋体组织培养

2．3．12 蜱虫饲养

第三章 全沟硬蜱不同吸血阶段的转录组和表达谱分析

3．1 引言

3．2 材料与方法

3．2．1 伦理声明

3．2．2 蜱虫采集和饲养

3．2．3 Illumina测序文库制备、测序及数据分析

3．2．4 全沟硬蜱代谢解毒酶基因家族分析

3．2．5 全沟硬蜱抗氧化酶基因家族分析

3．2．6 全沟硬蜱不同吸血阶段cDNA文库构建、测序以及数据分析

3．3 结果与分析

3．3．1 Illumina测序与序列拼接

3．3．2 序列比对分析

3．3．3 GO和KEGG注释

3．3．4 全沟硬蜱代谢解毒酶系统

3．3．5 全沟硬蜱抗氧化酶系统

3．3．6 全沟硬蜱转录组中利什曼原虫相关序列

3．3．7 不同吸血阶段基因差异表达情况

3．3．8 不同吸血阶段差异表达基因的GO富集分析

3．3．9 全沟硬蜱代谢解毒酶系表达模式

3．3．10 全沟硬蜱抗氧化酶系表达模式

3．4 讨论与小结

第四章 全沟硬蜱吸血前后微生物群落变化及其传菌能力分析

4．1 引言

4．2 材料与方法

4．2．1 伦理声明

4．2．2 蜱虫采集和饲养

4．2．3 基因组DNA提取

4．2．4 16S rRNA V4区扩增测序以及数据分析

4．2．5 PCR扩增和序列分析

4．3 结果与分析

4．3．1 吸血过程中微生物群落变化分析

4．3．2 吸血过程中传递给哺乳动物宿主的潜在病原菌

4．3．3 蜱传病原菌感染率检测

4．3．4 中国东北莱姆病螺旋体优势基因型分析

4．3．5 B．garinii对脊椎动物的感染力检测

4．4 讨论与小结

第五章 莱姆病螺旋体候选致病因子BBA68-BBA73初步研究

5．1 引言

5．2 材料与方法

5．2．1 莱姆病螺旋体及敲除载体

5．2．2 敲除载体构建

5．2．3 莱姆病螺旋体电击转化

5．2．4 莱姆病螺旋体基因敲除菌株筛选

5．2．5 人工针刺感染验证

5．3 结果与分析

5．3．1 BBA68敲除菌株的致病力分析

5．3．2 BBA69敲除菌株的致病力分析

5．3．3 BBA70敲除菌株的致病力分析

5．3．4 BBA71敲除菌株的致病力分析

5．3．5 BBA72敲除菌株的致病力分析

5．3．6 BBA73敲除菌株的致病力分析

5．4 讨论与小结

第六章 莱姆病螺旋体及莱姆病的血清学检测方法初步研究

6．1 引言

6．2 材料与方法

6．2．1 莱姆病螺旋体及全沟硬蜱

6．2．2 菌体培养

6．2．3 全菌裂解物制备

6．2．4 多克隆抗体制备

6．2．5 蜱-鼠动物模型建立

6．2．6 间接免疫荧光(IFA)

6．2．7 大鼠抗血清制备

6．2．8 SDS-PAGE和免疫印迹检测

6．2．9 条带检测及分子量计算

6．3 结果与分析

6．3．1 B31A3和NMJW1全菌抗原制备

6．3．2 不同莱姆病螺旋体全菌多抗的抗原反应特性

6．3．3 莱姆病螺旋体的免疫荧光检测

6．3．4 幼蜱中肠莱姆病螺旋体的免疫荧光检测

6．3．5 全沟硬蜱叮咬后大鼠血清的抗原反应特性

6．4 讨论与小结

第七章 总结与展望

7．1 总结

7．2 本研究创新点

7．3 展望

参考文献

在读期间发表论文

致谢