声明
英文缩略词(Abbreviation)
引言
参考文献
研究一 Bruton 酪氨酸激酶的抑制剂 PCI-32765对高糖诱导的BMMs 激活及炎症因子分泌的作用及机制
1.引言
2.实验材料
2.1主要仪器
2.2主要试剂
3 实验方法
3.1常用实验试剂配置
3.2 L929细胞上清的获取
3.3 原代骨髓来源巨噬细胞(BMMs)的提取
3.4骨髓来源巨噬细胞(BMMs)纯度和成熟度的检测
3.5不同浓度的高糖对BMMs活化的影响
3.6 Btk抑制剂PCI-32765对BMMs活力的影响(CCK-8法)
3.7 Btk抑制剂PCI-32765最佳抑制浓度
3.8 实验分组
3.9 Btk抑制剂PCI-32765对BMMs趋化作用的影响
3.10 ELISA法检测各组细胞上清中炎症因子
3.11 Western blot法检测各蛋白表达
3.12实时荧光定量PCR方法检测各组细胞炎症因子mRNA水平
3.13光共聚焦显微镜观察BMMs的激活和核转移
3.14统计学分析
4. 结果
4.1 骨髓来源巨噬细胞(BMMs)纯度的鉴定
4.2 高糖对BMMs活化的影响
4.3 Btk抑制剂PCI-32765对BMMs活性的影响
4.4 Btk抑制剂PCI-32765最佳抑制浓度
4.5 Btk抑制剂PCI-32765对高糖刺激的BMMs趋化作用的影响
4.6 Btk抑制剂PCI-32765对高糖刺激的BMMs活化的影响
4.7 Btk抑制剂PCI-32765对高糖刺激的BMMs上清中炎症因子的影响
4.8 Btk抑制剂PCI-32765对高糖刺激的BMMs炎症因子表达的影响
4.9 高糖刺激BMMs p-Btk的表达和抑制剂PCI-32765对其的抑制作用
4.10高糖在不同时间点对MAPK和NF-kB信号通路各蛋白的影响
4.11 Btk抑制剂PCI-32765对MAPK信号通路各蛋白的影响
4.12 Btk抑制剂PCI-32765对NF-kB信号通路各蛋白的影响
4.13 Btk抑制剂PCI-32765对NF-kBp65核转移的影响
5.讨论
6. 结论
参考文献
研究二 Bruton酪氨酸激酶在糖尿病肾病巨噬细胞激活的作用及分子机制
1.引言
2.实验材料
2.1主要仪器
2.2主要试剂
2.3实验动物
3 实验方法
3.1主要实验试剂的配置
3.2 敲基因小鼠鉴定
3.3 标本收集处理
3.4糖化血红蛋白的测定
3.5 24小时尿白蛋白排泄率测定
3.6肾脏组织形态学观察
3.7免疫组化
3.8 激光共聚焦：
3.9 Western blot法检测各组小鼠肾组织的蛋白表达
3.10炎症因子TNF-α，IL-1β和MCP-1mRNA在各组小鼠肾组织的表达
3.11统计学分析
4.结果
4.1敲基因小鼠的鉴定
4.2小鼠一般情况
4.3各组小鼠血糖、糖化血红蛋白、肾重体重比和UAER的变化：
4.4各组小鼠肾组织病理学改变：
4.5 各组小鼠肾组织巨噬细胞的浸润
4.6 各组小鼠肾组织IL-1β, MCP-1和iNOS免疫组化改变
4.7 蛋白iNOS，IL-1β，TNF-α，Btk和p-Btk在各组小鼠肾脏组织中的表达
4.8蛋白p38, pp38, ERK, p-ERK,JNK, p-JNK在各组小鼠肾脏组织中的表达
4.9蛋白p-IkB，IkB，NF-kBp65，p-NF-kBp65在各组小鼠肾脏组织中的表达
4.8 各组小鼠肾组织IL-1β, MCP-1, TNF-α mRNA水平变化
5.讨论
6.结论
参考文献
附 录
致谢
综述:炎症因子与糖尿病肾病
