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英文缩略词表(Abbreviation)
1.前言
2.材料
2.1 细胞株
2.2 药品和试剂
2.3 仪器和设备
2.4常用液的配制
3.实验方法
3.1.1细胞培养和传代
3.1.2 细胞计数法
3.1.3细胞冻存法
3.1.4细胞复苏法
3.2 蛋白印迹检测
3.2.1 提取蛋白
3.2.2 BCA蛋白定量法
3.2.3 蛋白电泳
3.2.4 转膜
3.2.5 封闭
3.2.6 一抗孵育
3.2.7 二抗孵育
3.2.8 显影
3.3 MTT法检测肝癌细胞的增殖抑制率
3.4 流式细胞术定量检测肿瘤细胞凋亡率
3.5 TUNEL检测细胞凋亡
3.6 吖啶橙染色检测和定量细胞自噬泡
3.7 电子显微镜观察细胞内自噬体的累积
3.8 小干扰RNA（siRNA）转染
3.9 免疫荧光和共聚焦定位
3.10 肝细胞癌组织芯片的制备
3.11 肝免疫组化法检测PERK、ATF6、IRE1α、LC3的表达
4.结果
4.1 褪黑素增加肝细胞癌对索拉菲尼的敏感性
4.1.1 低浓度褪黑素（10-5mmol/L）増敏索拉菲尼对肝细胞癌的疗效
4.1.2 Westernblot和TUNEL检测褪黑素和索拉菲尼联合应用的效果
4.2 索拉非尼可以诱导内质网应激和自噬的激活
4.3.1 内质网应激的抑制增加索拉菲尼诱导的凋亡
4.3.2降低自噬活性增加索拉菲尼引起的细胞凋亡
4.4 肝细胞癌中ERS和自噬相关标记蛋白的表达及其与临床病理参数的关系
4.5 索拉非尼诱导的内质网应激是自噬的上游事件
4.5.1 Westernblot法检测内质网应激和自噬之间的关系
4.5.2 免疫荧光检测索拉菲尼诱导的内质网应激和自噬之间的关系
4.6索拉非尼诱导的内质网应激通过PERK途径触发自噬
4.6.1 IRE1α、ATF6、PERK的siRNA的筛选
4.6.2 Westernblot法检测分别干扰三条UPR通路对自噬活性的影响
4.6.3 电镜和吖啶橙染色检测干扰UPR通路对自噬活性的影响
4.7 PERK-ATF4-beclin1通路在内质网应激相关自噬中起重要作用
4.7.1 Westernblot检测干扰ATF4对自噬活性的影响
4.7.2 ATF4-Beclin1介导内质网应激相关性自噬
4.8 褪黑素通过PERK-ATF4-beclin1途径抑制自噬
5.讨论
6.结论
参考文献
附录
本人简历
致谢
综述:索拉菲尼在肝细胞癌治疗中耐药机制研究进展
参考文献
