非受体酪氨酸激酶c-Abl调节细胞骨架的机理研究

声明

摘要

缩略词表

第1章 引言

1．细胞骨架的结构与功能

1．1 微丝的结构与功能

1．2 微管的结构与功能

1．3 中间纤维的结构与功能

2．非受体酪氨酸激酶c-Abl的结构与功能

3．本课题研究的科学问题

第2章 材料与方法

1．细胞株、菌种及质粒

2．分子生物学工具酶、抗体及主要试剂

2．1 分子生物学工具酶

2．2 抗体

2．3 细胞培养相关试剂

2．4 试剂盒

2．5 其他试剂

3．主要耗材

4．引物合成、质粒构建及序列测定

4．1 α-tubulin编码基因的获得及Flag-α-tubulin表达载体的构建

4．2 γ-tubulin编码基因的获得及Flag-γ-tubulin表达载体的构建

4．3 Flag-γ-tubulin突变体表达质粒的构建

5．细胞培养、冻存及转染

5．1 细胞培养与冻存

5．2 转染质粒的制备及细胞转染

6．免疫沉淀及免疫印迹

7．蛋白浓度的测定

8．c-Abl／Arg double knockdown A549稳定细胞系的建立

9．细胞免疫荧光染色技术

10．解离状态微管蛋白的分离

11．细胞周期同步化实验

12．Duolink实验

13．细胞侵袭实验

第3章 结果

第一部分 c-Abl酪氨酸激酶对微管细胞骨架的调节作用

1．1 c-Abl与细胞内三种主要微管蛋白存在相互作用

1．2 c-Abl激酶可使微管蛋白酪氨酸磷酸化

1．3 c-Abl可增强γ-tubulin的稳定性

1．4 c-Abl影响微管细胞骨架的形成

第二部分 c-Abl酪氨酸激酶对中间纤维的调节作用

2．1 c-Abl激酶可使cytokeratin酪氨酸磷酸化

2．2 c-Abl缺失可抑制vimentin的表达

2．3 c-Abl缺失可抑制肿瘤细胞的侵袭

第4章 讨论

1．c-Abl酪氨酸激酶对微管细胞骨架的调节作用

2．c-Abl酪氨酸激酶对中间纤维的调节作用

第5章 结论

参考文献

致谢

硕士期间发表论文