自体尿源性干细胞结合3D多孔小肠粘膜下基质用于兔尿道重建的实验研究

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目的：探索应用自体兔尿源干细胞细胞（rabbit urine-derived stem cells，rUSCs）复合小肠黏膜下基质（Small intestinal submucosa，SIS）构建兔组织工程尿道的可行性，为临床构建组织工程尿道，用于尿道下裂残疾、长段尿道缺损等复杂、疑难情况尿道重建奠定基础。　　方法：收集24只雄性新西兰大白兔尿液及膀胱冲洗液，分离、培养得到rUSC，检测其自我更新及体外多向分化（平滑肌和上皮方向）能力；用5%过氧乙酸（peracetic acid，PAA）处理SIS材料，对其微结构、免疫原性、生物相容性进行研究，并将PKH67标记的rUSCs与SIS材料复合；随机将24只雄性新西兰大白兔分为两组，并建立尿道缺损模型，缺损长度约为2.0cm，对照组应用单纯5% PAA处理后的SIS材料修复（12只），实验组应用5% PAA处理后并复合rUSCs的SIS材料修复（12只）。均于术后2周、3周、4周、12周行组织学和Western Blot检测，12周行尿道造影。　　结果：原代培养第4天即可在镜下观察到rUSC单克隆细胞，在第6天可形成克隆团，在第11天出现细胞融合，形态成“米粒”状，大小均一、排列紧凑；rUSCs经体外诱导分化后，能高效的分化为平滑肌细胞和上皮细胞。经5%PAA处理后，SIS材料表面变得疏松多孔，且DNA含量进一步降低（P＜0.05）；组织学提示实验组平滑肌束再生在各个时间点均优于对照组（P＜0.05），且更有序；上皮层数和新生血管数量在早期（2、3、4周）好于对照组（P＜0.05），在晚期（12周）差异无统计学意义（P＞0.05）；对照组基质出现炎性细胞浸润和纤维化；尿道造影显示实验组仅一只出现轻微尿道狭窄，而对照组三只均出现轻微尿道狭窄。免疫荧光显示 rUSCs在体内可转化为平滑肌和上皮细胞。　　结论：1）rUSCs能够通过简单无创的方法获取，具有良好的自我更新能力，体外易于培养和扩增，并且具有分化成平滑肌细胞和上皮细胞的能力，是一种理想的组织工程种子细胞来源；2）SIS材料经5%PAA处理后，SIS支架材料孔径增大，孔隙率增高，且细胞成分进一步减少，可作为组织工程支架材料来源；3）复合 rUSCs的3D多孔SIS材料能促进尿道组织再生，减少炎症反应、尿道狭窄等并发症。

著录项

作者
刘洋;
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作者单位

重庆医科大学;

展开▼
授予单位重庆医科大学;
学科儿科学
授予学位硕士
导师姓名魏光辉;
年度 2017
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类
关键词
尿源性干细胞,小肠粘膜下基质,组织工程,尿道重建,动物模型;

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