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结核分枝杆菌特异性重组抗原在结核病血清学诊断中的研究

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第一部分 MTB特异性抗原重组蛋白ELISA检测系统建立

材料和方法

结果

讨论

第二部分 MTB特异性抗原在结核病血清学诊断中的应用

材料和方法

结果

讨论

结论

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摘要

目的:建立规范的结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)特异性抗原重组蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)检测系统。用建立的检测系统检测结核病(tuberculosis,TB)患者血清，以确定MTB特异性抗原重组蛋白检测的灵敏度和特异性，试图提高结核病的临床实验室诊断水平。 方法:采用方阵法和ROC(Receiver Operating Characteristic)曲线法确定MTB特异性抗原重组蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63酶联免疫吸附试验最佳抗原包被浓度和酶标二抗浓度，以ROC曲线法确定四种抗原蛋白ELISA法检测的“阳性判断”值(cut-off值)，建立起规范的ELISA检测系统。用已建立的四种抗原蛋白ELISA检测系统检测临床收集到的标本，以ROC曲线法确定四种抗原蛋白的灵敏度及特异性值。对同一批血清标本进行结核抗体检测。将四种重组特异性抗原联合组与痰涂片组、结核抗体组的灵敏度及特异性值进行比较，并对组间差异进行统计学分析。 结果: 1．MTB特异性抗原重组蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63 ELISA检测系统的抗原包被浓度和酶标二抗浓度分别在1∶32000和1∶1000；1∶64000和1∶1000；1∶64000和1∶1000以及1∶128000和1∶1000时为最佳。 2．Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63四种特异性抗原检测其各自相应的抗体，灵敏度和特异性分别是47.60﹪和93﹪、59.60﹪和92.30﹪、68.00﹪和92.30﹪以及70.41﹪和87.25﹪，特异性抗原联合组检测的灵敏度和特异性为82.4﹪和88.3﹪。痰涂片组和结核抗体组检测结核病的灵敏度分别是42.2﹪和51.9﹪，结核抗体组特异性是81.8﹪。Mtb8.4蛋白与38KD蛋白和MPT63蛋白呈正的线性相关，MPT64蛋白与38KD蛋白呈正的线性相关，四种抗原之间虽然存在一定的相关性，但是不能相互替代，四种抗原相互补充的方法检测结核病的检测效果最为理想。 3．特异性抗原联合组与经典的抗酸染色法(痰涂片组)和目前临床推广使用的结核抗体检测法(结核抗体组)相比，检测结核病均显示有统计学差异。特异性抗原联合组检测结核杆菌的灵敏度和特异性优于目前临床推广使用的结核抗体检测法(结核抗体组)。灵敏度显著优于经典的抗酸染色法(痰涂片组)。 4．结核病病人的病程与Mtb8.4蛋白和38KD蛋白，呈正的线性相关。白细胞(粒细胞)与38KD蛋白，呈正的线性相关。血清白蛋白与38KD蛋白存在负的线性相关关系。 结论: 1．建立了MTB特异性蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63规范化的ELISA检测系统。 2．用方阵法和ROC曲线获得特异性抗原重组蛋白的最佳抗原包被浓度和酶标二抗浓度，是建立规范化的EUSA检测系统的关键环节。 3．四种抗原之间虽然存在一定的相关性，但是不能相互替代，四种特异性抗原联合相互补充的方法检测结核病的检测效果最为理想。特异性抗原联合组无论与经典的抗酸染色法(痰涂片组)相比还是与目前临床推广使用的结核抗体检测法(结核抗体组)相比，检测结核病均显示有统计学差异。特异性抗原联合组检测结核杆菌的灵敏度和特异性优于目前临床推广使用的结核抗体检测法(结核抗体组)。灵敏度显著优于经典的抗酸染色法(痰涂片组)。 4．Mtb8.4蛋白和38KD蛋白抗原相应的抗体随病程的延长相应增高，有可能成为病情评估和疗效判断的指标。但有待于进一步的临床验证。

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