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冬虫夏草相关菌与中国被毛孢之间关系的研究

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1绪论

1.1冬虫夏草的研究概况

1.2冬虫夏草相关菌的研究

1.3冬虫夏草寄主的研究概述

1.4两种微生物之间的相互关系

1.5研究目的与意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 试验方法

3 结果与分析

3.1中国被毛孢的形态学观察

3.2新鲜冬虫夏草DNA分析结果

3.3冬虫夏草相关菌与中国被毛孢之间生长关系的研究

3.4冬虫夏草相关菌对中国被毛孢抑制作用的研究

3.5冬虫夏草相关菌和中国被毛孢复合侵染蝙蝠蛾幼虫试验

4 讨论

4.1冬虫夏草总DNA中未检测到蝙蝠蛾拟青霉的原因分析

4.2提前接种中国被毛孢的时间与相关菌组合对中国被毛孢作用分析

4.3冬虫夏草相关菌发酵液对中国被毛孢生长影响实验中存在的问题

4.4复合侵染试验中存在的问题

5 结论

致谢

参考文献

附录

攻读学位期间的研究成果

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摘要

本文通过对冬虫夏草的资源分布,生活史,化学成分及药理学特性,无性型等方面的研究,发现目前还没有一个准确的实验能够证明有多少种真菌参与了冬虫夏草的形成过程。本试验组已提出了冬虫夏草相关菌,它是从冬虫夏草中分离,对中国被毛孢有作用并可侵染蝙蝠蛾幼虫的那些菌株的研究。利用已分离鉴定的6株抑制中国被毛孢生长的冬虫夏草相关菌,研究冬虫夏草相关菌和中国被毛孢的生长关系。  以新鲜野生冬虫夏草为材料,分别提取不同发育阶段的不同部位的冬虫夏草总DNA,采用真菌通用引物(ITS1/ITS4)进行PCR扩增后将产物测序,上网分析比对。为了进一步研究冬虫夏草相关菌对中国被毛孢的作用效果,将本试验组已分离得到的6株冬虫夏草相关菌两两组合为21组相关菌组合与中国被毛孢进行对歭培养。并对冬虫夏草相关菌发酵液对中国被毛孢生长的影响进行了培养试验。此外,还用冬虫夏草相关菌与中国被毛孢复合菌对蝙蝠蛾幼虫进行侵染试验。试验得到的主要结果如下:  (1)分析新鲜野生冬虫夏草总DNA发现,不同生长阶段不同部位冬虫夏草中用常规PCR最易检测到的真菌是冬虫夏草菌(Ophiocordyceps sinensis)。  (2)冬虫夏草相关菌组合对中国被毛孢对歭试验中发现,在提前10d接种中国被毛孢时,21组相关菌组合对中国被毛孢均产生了不同程度的抑制作用,抑制率均较小,在4.0-9.0%之间。提前20d和提前30d接种时,冬虫夏草相关菌各组合对中国被毛孢的抑菌率随着提前接种中国被毛孢时间的增加而减小(P<0.05),有部分相关菌组合对中国被毛孢的生长有一定的促进作用。  (3)测定冬虫夏草相关菌不同发酵液对液体和固体培养基中中国被毛孢生长干重和菌落直径发现,在液体培养基中,随着发酵液添加比例的增加,中国被毛孢的干重并没有随着发酵时间的延长而减小;在固体培养基上,发酵液对中国被毛孢的生长起到了一定的促进作用,不同的冬虫夏草相关菌发酵液的促进作用各不相同,说明在冬虫夏草相关菌的发酵液中不含抑制中国被毛孢生长的物质。冬虫夏草相关菌对中国被毛孢的抑制作用仅是营养竞争而不是拮抗作用。  (4)冬虫夏草相关菌与中国被毛孢复合侵染蝙蝠蛾幼虫,侵染率介于冬虫夏草相关菌单独侵染蝙蝠蛾幼虫和中国被毛孢单独侵染蝙蝠蛾幼虫的侵染率之间,变化幅度范围为10%-50%。

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