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目 录
第一章 绪论
1.1.1 油脂中的胶质
1.1.2 油脂中常见磷脂的结构及特点
1.1.3 主要油脂脱胶技术
1.2.1 脂肪酶的简介
1.2.2 脂肪酶的结构特征
1.2.3 脂肪酶的催化机制
1.2.4 脂肪酶在不同行业的应用研究
1.3 脂肪酶HL1232 的简介
1.4 部分脂肪酶的磷脂酶活力来源机制
1.5 脂肪酶的底物选择性
1.6.1 核磁共振技术在酶结构与功能研究中的应用
1.6.2 电子顺磁共振技术在酶结构与功能研究中的应用
1.6.3 分子对接及分子动力学模拟技术在酶结构与功能研究中的应用
1.7 脂肪酶的分子改造
1.7.1 脂肪酶的定向进化
1.7.2 脂肪酶的理性设计
1.8 本课题研究背景、意义以及主要研究内容
第二章 酶法催化大豆毛油脱胶研究
2.1 引言
2.2 实验材料与仪器
2.2.1 脂肪酶的基因序列
2.2.2 菌种与质粒
2.2.3 主要实验试剂
2.2.4 主要实验仪器与设备
2.2.5主要培养基及缓冲液的配制
2.3 实验方法
2.3.1 大豆毛油脱胶酶筛选实验酶种类的选择
2.3.2 脂肪酶基因工程菌的构建
2.3.3 脂肪酶的表达与纯化
2.3.4 脂肪酶的酶学性质测定
2.3.5大豆毛油酶法脱胶的步骤
2.4 结果与讨论
2.4.1 脂肪酶的表达与纯化
2.4.2 脂肪酶的酶学性质测定
2.4.3 脂肪酶催化大豆毛油脱胶效果对比
2.5 本章小结
第三章脂肪酶HL1232 C-末端不同肽段对其底物选择性的影响
3.1 引言
3.2.1 菌株与载体
3.2.2 主要实验试剂
3.2.3 主要实验仪器与设备
3.2.4 主要缓冲液的配制
3.3 实验方法
3.3.1 脂肪酶TLL-wt与HL1232-wt的酶学性质对比及氨基酸序列分析
3.3.2 脂肪酶HL1232的生物信息学分析及3D空间模型的构建
3.3.3 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的设计及引物设计
3.3.4 脂肪酶HL1232 C-末端缺失突变体的构建
3.3.5脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的表达与纯化
3.3.6脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体酶学性质测定
3.4 结果与讨论
3.4.1 脂肪酶TLL-wt与HL1232-wt的酶学性质对比及氨基酸序列分析
3.4.2 脂肪酶HL1232生物信息学分析及3D空间模型的构建
3.4.3 脂肪酶HL1232 C-末端肽段氨基酸序列分析
3.4.4 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的表达与纯化
3.4.5 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的酶学性质对比
3.5 本章小结
第四章 脂肪酶HL1232 底物选择性的核磁共振及电子顺磁共振研究
4.1 引言
4.2.1 菌株与载体
4.2.2 主要实验试剂
4.2.3 主要实验仪器与设备
4.2.4 主要缓冲液的配制
4.3 实验原理及方法
4.3.1 脂肪酶HL1232底物选择性分子机制的提出
4.3.2 实验原理
4.3.3 19F位点特异性标记实验突变体位点的选择
4.3.4 位点特异性自旋顺磁共振标记实验突变体位点的选择
4.3.5 HL1232代表性氨基酸突变体的构建
4.3.6 HL1232代表性氨基酸突变体的表达纯化及酶活测定
4.3.7 19F位点特异性标记实验标记步骤
4.3.8 19F位点特异性标记实验参数设置及图谱采集
4.3.9 位点特异性自旋顺磁共振标记实验标记步骤
4.3.10 位点特异性自旋顺磁共振标记实验参数设置与图谱采集
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 HL1232各代表性氨基酸突变体的表达纯化及标记
4.4.2 HL1232各代表性氨基酸突变体的酶活测定
4.4.3 HL1232与磷脂结合前后代表性氨基酸构象的 19F位点特异性标记分析
4.4.4 HL1232与不同底物结合前后代表性氨基酸的动力学信息分析
4.4.5 HL1232与不同底物结合前后代表性氨基酸的易趋性参数分析
4.5 本章小结
第五章 脂肪酶HL1232 底物选择性的分子模拟研究
5.1 引言
5.2 实验方法
5.2.1 分子对接体系方法的建立
5.2.2 分子动力学模拟体系方法的建立
5.3.1 脂肪酶HL1232和TLL与磷脂底物分子对接结果对比
5.3.2 脂肪酶HL1232和TLL与甘油三酯底物分子对接结果对比
5.3.3 脂肪酶HL1232和TLL与甘油二酯底物分子对接结果对比
5.3.4 脂肪酶HL1232和PCEST、EST1以及TTEST结构对比分析
5.3.5 脂肪酶HL1232与不同底物结合的分子动力学模拟分析
5.4 本章小结
结论与展望
1.主要研究结论
2.主要创新点
3.未来工作展望
参考文献
攻读博士学位期间取得的研究成果
致 谢
答辩决议书
华南理工大学;
