腐烂茎线虫中国新寄主种群记述及其LAMP快速检测方法研究

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茎线虫属（DitylenchusFilipjev, 1936）是植物上的一类重要病原生物，也是分类上最难鉴定的属之一，其中腐烂茎线虫（Ditylenchus destructor）能对多种农作物造成严重危害，是许多国家和地区的检疫性线虫。本文利用形态学和分子生物学特征相结合的方法对从胡萝卜中分离出的茎线虫进行了种类鉴定，并建立了基于28S rRNA序列利用环介导恒温扩增技术对其进行快速检测的技术，具体研究结果如下。　　1、本文首次记述了中国胡萝卜上的腐烂茎线虫。从胡萝卜中分离出的茎线虫主要形态学鉴定特征为：体长=896.3-1122.3μm；a=30.9-41.5μm；b=7.1-10.4μm；c=12.1-16μm；c`=3.4-4.8μm；v=79.3-82.3μm；口针长=9.7-11μm，与已报道的腐烂茎线虫测量值均有交叠；通过分子生物学方法得到其ITS和28S D2-D3扩展区序列，分别为916bp和779bp，经过在线比对，发现与已报道的中国甘薯上D. destructor ITS序列（EF208210）和28S D2-D3扩展区序列（EU400636）的相似性均为99%，因此被确认为腐烂茎线虫。　　2、建立了腐烂茎线虫LAMP快速检测鉴定方法。该方法使用的LAMP特异引物是基于腐烂茎线虫28S D2-D3扩展区序列设计的，包括DdBIP、DdFIP、DdF3、DdB3和DdLF；LAMP优化反应体系为Mg2+的浓度6.0 mmol·L-1、dNTPs的浓度为0.8 mmol·L-1、Bst 2.0聚合酶的浓度为0.2 U·μL-1、反应温度65℃、反应时间为50 min；分别采用凝胶电泳和SYBR Green Ⅰ染料检测LAMP反应结果。　　3、对建立的腐烂茎线虫检测技术使用凝胶电泳和SYBR Green Ⅰ染料目测检测法进行了特异性、灵敏性和稳定性研究。结果表明该检测方法可以稳定的检测到来自不同虫态（雌虫、雄虫、幼虫或卵）的个体，不同寄主和地区的腐烂茎线虫种群，还可以从多种线虫混合的样品、植物组织样品和土壤样品中直接检测出腐烂茎线虫，检测灵敏度达到1/1000条虫DNA。　　本研究为我国加强胡萝卜线虫病害的监测和防控提供了依据，为口岸和调运检疫以及田间调查监测中腐烂茎线虫的快速检测鉴定提供了新的有效方法，对防止腐烂茎线虫扩散传播酿成更大灾害具有重要意义。

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作者
丁善文;
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作者单位

华南农业大学;

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授予单位华南农业大学;
学科植物保护
授予学位硕士
导师姓名徐春玲;
年度 2018
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类
关键词
腐烂茎线虫,胡萝卜,环介导等温扩增,28SrRNA,快速检测;

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