台湾线虫草发酵菌丝体的自由基清除活性成分研究

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本文对台湾线虫草Ophiocordyceps formosana Kobayasi& Shimizu发酵菌丝体的自由基清除活性及成分进行了系统的研究分析，内容包括对台湾线虫草 RCEF0868和RCEF5491菌株进行了液体发酵培养，得到发酵菌丝体的冻干粉；以DPPH、羟自由基和超氧自由基的清除活性为指标，选择自由基清除活性较优菌株并对提取溶剂进行了优化选择；以优化选择的提取剂对较优菌株RCEF0868进行提取处理，得粗提物冻干粉并对其 DPPH和羟自由基的清除活性进行定量分析；通过 HPLC分离和活性测定的方式对主要活性成分进行了初步定位分析，并根据LC-MS的分析结果对活性成分的分子式和化学结构进行初步的分析和推断；根据自由基清除活性定量分析和活性成分的液质联用初步定性结果，进一步以 DPPH自由基的清除活性为指标，对RCEF0868菌株有关活性物质进行了提取方法的优化。
　　较优菌株和提取溶剂的选择结果表明：RCEF0868菌株的自由基清除活性相对较好，不同溶剂提取物对自由基的清除活性存在较大差异，以水和甲醇两种提取物的活性较高。因此，本研究选定RCEF0868菌株为研究对象，对其水提取和甲醇提取物的DPPH和羟自由基清除活性进行进一步分析。
　　RCEF0868菌株活性定量分析结果表明：随样品浓度的递增，其水提物和甲醇提取物对两种自由基的清除活性有所增强，当提取物浓度为5.0mg/ml时，反应20min后，水提取和甲醇提取物对DPPH的清除率分别达到87.83％和91.70%，其半抑制浓度 IC50分别为0.85mg/ml和1.23mg/ml；对羟自由基的清除率分别达到90.04%和61.60%，其半抑制浓度 IC50分别为1.37mg/ml和2.91mg/ml。综上可知，RCEF0868菌株的水提取和甲醇提取物对DPPH均具有较好的清除活性，另外水提物对羟自由基的清除活性也较好，而甲醇提取物对羟自由基的清除活性相对较弱。
　　活性组分的HPLC分离测定和LC-MS分析结果表明：水提取物中共检测出三个活性成分，其分子式分别为C6H14O6(1)、C14H17N5O8(2)和C20H33N5O9(3)；在甲醇提取物中检测出的活性成分除化合物1外，还包括 C30H22O11(4)、C30H22O10(5)和C30H18O10(6)，以上六种成分均表现出DPPH自由基清除活性，其中化合物1、4和5同时还具有羟基自由基的清除活性。通过查询天然产物数据库和参阅报道初步推断，化合物3可能为一种新化合物，其他化合物依次为D-Mannitol、Succinoadenosine、4a-Oxyrugulosin、Rugulosin和Skyrin，其中Succinoadenosine和4a-Oxyrugulosin为首次在虫生真菌中发现。
　　提取优化中单因素试验结果表明：料液比(mg/ml)、温度(℃)和甲醇体积比率(%)是影响DPPH自由基清除率相对主要的因素。进一步的三因素响应面优化结果表明：料液比(x1)和甲醇体积比率(x3)这两种因素对DPPH清除率(y)影响显著(P<0.05)，这两种因素之间不存在明显影响清除率的相互作用，虽然DPPH清除率随温度(x2)升高有所增强，但温度对清除率的影响并不显著。SAS9.0软件模拟得到最优的提取条件为：料液比12mg/ml，甲醇体积比率80%，清除率可达到81.08%。按最优提取条件的验证试验结果为82.70±0.87(%)，达到优化模拟的清除率水平，进一步表明模拟优化的准确性。

著录项

作者
李扬眉;
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作者单位

安徽农业大学;

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授予单位安徽农业大学;
学科微生物学
授予学位硕士
导师姓名李春如;
年度 2014
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类应用微生物学;
关键词
台湾线虫草; 自由基; 活性测定; 发酵菌丝体;

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