吉马酮通过调节NLRP3炎性体组装及巨噬细胞极化治疗急性肺损伤的研究

引言

材料与方法

2.1.1 实验动物

2.1.2 NLRP3表达载体及病毒包裹

2.1.3 主要实验材料和试剂

2.1.4 主要实验仪器

2.2 实验方法

2.2.1 ANA-1细胞复苏并传代

2.2.2 细胞计数

2.2.3 MTT细胞活力试验

2.2.4 ANA-1细胞的分组及培养

2.2.5 ELISA法检测IL-10和IL-12

2.2.6 实时定量PCR检测iNOS和CD206的mRNA表达

2.2.7 Western blot蛋白表达检测

2.2.8 小鼠饲养

2.2.9 动物分组和给药干预处理

2.2.10 小鼠各种检测标本的获取

2.2.11 小鼠肺组织HE染色

2.2.12 Western blot验证pc-NLPR3组小鼠NLRP3过表达

2.2.13 流式细胞术检测巨噬细胞CD16/32、CD206及F4/80表达

2.2.14实时定量PCR检测巨噬细胞iNOS和CD206 mRNA表达

2.2.15 小鼠肺组织MPO活性测定

2.2.16 小鼠肺组织湿重/干重比值测定

2.2.17 ELISA法检测BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量

2.2.18 统计学分析

结果

3.1 MTT实验确定吉马酮的药物浓度

3.2 吉马酮对ANA-1细胞极化的影响

3.2.1 ELISA法验证吉马酮诱导ANA-1细胞极化

3.2.2 实时定量PCR验证吉马酮诱导ANA-1细胞极化

3.3 吉马酮抑制NLRP3炎性体的激活

3.4 吉马酮抑制ANA-1细胞Caspase-1的活化和IL-1β的分泌

3.5 急性肺损伤动物模型的建立

3.6 Western blot方法验证pc-NLRP3组小鼠NLRP3过表达成功

3.7 吉马酮能够减轻LPS诱导的小鼠肺损伤程度

3.8 吉马酮促进体内巨噬细胞转型

3.9 NLRP3过表达可以抑制吉马酮治疗急性肺损伤的作用

讨论

结论

参考文献

综述:对急性肺损伤在临床及分子水平上的研究总结

综述参考文献

攻读学位期间的研究成果

英文缩略词汇表及中文对照

致谢

声明