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高效液相荧光法测定人尿液中儿茶酚胺浓度用于嗜铬细胞瘤诊断及原发性高血压的管理

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前言

第一部分：建立人体尿液中CAs浓度检测方法并进行方法学验证

1实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 结论

第二部分： CAs浓度检测在PHEO诊断中的应用

1实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4讨论

5 结论

第三部分：CAs浓度与EH相关性分析并开展EH的慢病管理

1实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 结论

讨论（总）

结论（总）

参考文献

附录

致谢

综述: 内源性儿茶酚胺导致的心脏疾病及其机制

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摘要

机体内儿茶酚胺类化合物（Catecholamines，CAs）主要包括去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)、肾上腺素（epinephrine，E)、多巴胺(Dopamine，DA)。NE、E、DA是体内重要的信息传递物质，正常量的CAs在维持人体心脏泵血，血压调节，能量代谢等多种生理功能平衡中起着极其重要的作用。过量的CAs则可导致多系统并发症，尤其是心血管系统和内分泌系统。其中严重的心脑血管并发症如高血压危象、脑卒中等可危及生命。而嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma，PHEO)恰是一种以大量分泌 CAs为典型生化学特征的肿瘤，通过检测人体内 CAs的浓度，可为PHEO的诊断提供重要依据。研究已证实交感神经兴奋性增高是原发性高血压(Essential hypertension，EH)重要的致病机制之一，NE、E作为交感神经兴奋性递质，通过测其浓度可快速直接地评估EH患者交感神经兴奋性，进而指导用药，随访，风险因素干预等，为EH患者提供更有效的慢病管理。
　　研究内容包括以下三个部分：
　　1.建立人体尿液中CAs浓度检测方法并进行方法学验证
　　采用自制活性氧化铝进行样本处理，在弱碱性 Tris缓冲液条件下吸附尿液样本中CAs，甲醇，蒸馏水洗涤，0.2 mol/L的HCl洗脱。高效液相荧光法测定，并进行方法学验证。结果发现，重酒石酸去甲肾上腺素、肾上腺素、盐酸多巴胺在1.56～1000ng/ml浓度范围内线性关系良好（r=0.9995、0.9997、0.9998）；日内及日间精密度RSD在0.31％～8.02%之间；高、中、低三个浓度的平均方法回收率在94.22%～108.69%之间。实验结果表明，本方法专属性高、线性范围广、准确稳定、样本处理简便快速，适合临床推广应用。
　　2. CAs浓度检测在PHEO诊断中的应用
　　根据PHEO临床表现，确定PHEO可疑病例的筛查指征，于某三甲医院收集疑似病例尿液样本。采用高效液相荧光法（HPLC-FD），检测患者尿液中NE、E、DA；采用酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测NE、E中间代谢产物去甲变肾上腺素（normetanephrine，NMN）、变肾上腺素（metanephrine，MN）浓度；重氮盐斑点法进行 CAs最终代谢产物香草苦杏仁酸（vanillylmandelic acid，VMA）的定性检测。最终根据病理诊断，对比各指标在PHEO诊断中的优劣。127例PHEO疑似病例尿液检测结果：11例尿液样本NE、E、DA、NMN、MN浓度明显高于正常范围，其中NE、DA、NMN浓度达正常高值的2倍以上，高度疑似为PHEO，而该11例中VMA仅5例阳性。此11位患者中9例行手术治疗，术后经病理证实该9例为嗜铬细胞瘤。实验结果表明，对比VMA的定性检测，NE、E、DA、NMN、MN的浓度检测对于PHEO的诊断具有更为准确的参考价值。其中HPLC-FD法可同时检测NE、E、DA，快速、经济，适合临床推广应用。
　　3. CAs浓度与EH相关性分析并应用于EH的管理
　　经知情同意，于某三甲医院收集EH患者尿液样本，门诊、电话、QQ、微信等方式完善患者信息，建立EH患者慢病管理档案。采用HPLC-FD法测定EH患者尿液中CAs浓度，与正常对照组比较，分析评估EH的风险因素，进行个体化的健康教育、用药指导、危险因素干预等慢病管理，随访1年，2～4次/月。结果发现EH组CAs浓度显著高于正常对照组，伴有吸烟、饮酒、BMI≥24、摄盐量大、夜班风险因素的 EH患者尿液中NE和E浓度显著高于非风险因素 EH患者（p<0.05）。NE和DA浓度随焦虑程度加剧而增高，呈一定的相关性。122例接受慢病管理满一年的EH患者，高血压认知水平有明显改善（p<0.01），用药依从性显著提高（p<0.01），血压达标率达92.6%。实验结果表明，EH患者交感神经兴奋性高于正常组，CAs浓度与EH风险因素存在一定的相关性，CAs浓度的检测为EH的慢病管理的开展提供一定的科学依据，而科学有效的慢病管理可显著提高患者对高血压的认知水平进而显著提高血压达标率。

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