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低频稳态强噪声暴露对大鼠听觉系统影响的研究

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前言

1.前言

2.材料与方法

2.1实验动物

2.2 实验材料及方法

2.3 实验步骤及方法

2.4 HE染色步骤

2.5 免疫组织化学染色:

2.6 免疫组化染色结果判读

2.4 统计学分析

3 结果

3.1耳镜检查结果

3.2 ABR结果

3.3 扫描电镜检查结果

3.4 免疫组化结果

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述

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摘要

目的:建立低频稳态强噪声噪声性的耳聋模型,通过对大鼠低频稳态强噪声暴露后不同时期听性脑干反应变化检测、耳蜗扫描电镜观察以及内耳细胞凋亡检测,了解低频稳态强噪声对大鼠听力损伤严重程度、耳蜗结构损伤的特点及内耳细胞凋亡的变化,初步探讨低频稳态强噪声性听力损伤特点及机制。
  方法:52只SD大鼠随机分为正常对照组(Pr)13只和暴露组39只,暴露组包括即刻组(E0组)、3天组(E3组)和7天组(E7组)各13只,经强度为150dB中心频率在500Hz的稳态噪声持续暴露10分钟后,分别于暴露后即刻、3天、7天,行听性脑干反应变化检测,检测结束后处死动物取双侧耳蜗,一侧耳蜗行耳蜗扫描电镜观察,另一侧耳蜗取材制作耳蜗石蜡切片行HE染色及免疫组化观察。
  结果:经150dB,500Hz稳态强噪声暴露后即刻组,大鼠ABR阈值88.69±5.40dB,3天组阈值76.50±15.17dB,7天组阈值75.12±18.99dB。暴露后各时间点ABR阈值较暴露前显著增高(P<0.01),E0组与E3组、E7组之间有统计学差异(P<0.05),E3组与E7组之间无统计学意义(P>0.05)。耳蜗扫描电镜观察大鼠内、外毛细胞均严重损伤,表现为毛细胞静纤毛缺失、融合及团状变,并可见螺旋器表面渗出性改变。外毛细胞较内毛细胞损伤重,耳蜗各圈均有损伤,由底圈向顶圈毛细胞损伤逐渐减轻,即刻组损伤最重,3天组和7天组损伤较即刻组有所减轻。免疫组化结果显示低频强声暴露后各组耳蜗Corti器、螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋韧带均可见Caspase-3染色程度不同的表达,对照组无明显表达,实验暴露组各时间点平均光密度值与对照组之间有统计学差异(P<0.01),E0组与E3组、E7组之间有统计学差异(P<0.05),E3组与E7组之间有统计学差异(P<0.05)。
  结论
  1.低频稳态强噪声对大鼠听觉系统造成严重损伤,即刻时最严重,3天组仅可轻度恢复,7天组无进一步改善。
  2.低频稳态强噪声可造成大鼠耳蜗形态严重损伤,耳蜗形态损伤以底圈最重,外毛细胞损伤较内毛细胞重。
  3.低频稳态强声暴露后各组大鼠耳蜗Corti器、血管纹和螺旋韧带、螺旋神经节细胞均可见Caspase-3染色程度不同的阳性表达,Caspase-3介导的内耳细胞凋亡可能在噪声性耳聋的发病机制中起重要作用。
  4.耳蜗Corti器、螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋韧带细胞凋亡变化与ABR结果基本一致,耳蜗内外毛细胞损伤程度变化趋势与ABR结果基本一致。

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