呼吸道合胞病毒感染小胶质细胞活化Toll样受体3、7介导炎性反应的初步研究

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目的：探讨呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染小胶质细胞(BV2)后,Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)和Toll样受体7(Toll-like 7 receptor,TLR7)水平的变化,初步研究TLR3和TLR7介导产生的下游炎性因子在神经系统病毒感染中表现出的炎性反应,为临床RSV感染中枢神经系统的预防和治疗提供新的思路。
　　方法：(1)RSV感染体外培养的BV2,免疫荧光法分12、24、和36h检测RSV融合蛋白(F蛋白),观察RSV是否可以感染BV2。
　　(2)分别于感染4、8、12、16、24、和36h收集细胞,以未感染细胞作为对照组。用Trizol提取细胞总RNA,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TLR3、TLR7的mRNA表达量的变化。
　　(3)免疫印迹法(Western-blot)检测RSV感染4、8、12、16、24、和36h核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白水平的变化,以未感染细胞作为对照组。
　　(4)酶联免疫吸附法(ELISA)检测感染不同时间点细胞上清中TNF-α含量的变化,以未感染细胞作为对照组。
　　结果：(1)免疫荧光结果显示,和阴性对照比较,RSV感染BV2后12、24、36h可见在DAPI染色对照的细胞部位均可以见FITC标记RSV-F蛋白的绿色荧光,而阴性对照未见。并且该荧光呈增强趋势,有时间依赖性,。
　　(2)RT-PCR法测定结果显示,正常组中TLR3、TLR7mRNA转录水平较低,而在RSV感染组,随着感染时间增加TLR3、TLR7mRNA转录水平不断提高。感染后4、8、12、16、24、36h不同时点感染组TLR3、TLR7mRNA转录水平均高于正常组,差异均有统计学意义,且在感染组中TLR3、TLR7mRNA转录水平有随时间延长而呈升高趋势,各时点间差异有统计学意义。
　　(3)Western blot法测定结果显示,正常组中NF-κB蛋白水平表达量较低,而在RSV感染组,随着感染时间增加NF-κB表达不断上调。感染后4、8h升高未见统计学意义,而从12、16、24、36h,各时点感染组NF-κB蛋白表达水平均高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.01),且在感染组中,NF-κB蛋白表达水平有随时间延长而呈升高趋势,各时点间差异有统计学意义。
　　(4)ELISA法的检测结果显示,正常组中TNF-α含量较低,而在RSV感染组,随着感染时间增加TNF-α含量不断提高。感染后4、8、12、16、24、36h,不同时点感染组TNF-α含量均高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.01),且在感染组中,TNF-α含量有随时间延长而呈升高趋势,各时点间差异有统计学意义。
　　结论：RSV可以感染中枢神经系统内小胶质细胞BV2,活化TLR3、TLR7后诱导NF-κB的上调,从而使下游细胞炎性因子TNF-α分泌升高,过度的炎性反应可能与神经系统症状的发生相关。

著录项

作者
李振兴;
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作者单位

安徽医科大学;

展开▼
授予单位安徽医科大学;
学科微生物学
授予学位硕士
导师姓名黄升海;
年度 2013
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 R373.14;
关键词
呼吸道合胞病毒; 小胶质细胞; Toll样受体3; Toll样受体7; 炎性反应; 中枢神经系统;

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