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复方烫伤膏对大鼠深Ⅱ度烫伤模型的保护作用及机制研究

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1 实验材料

1.1 动物

1.2 药品与试剂

1.3 仪器与设备

2 实验方法

2.1 动物模型制备[28]及分组给药

2.2 烫伤大鼠创面指标测定

2.3 统计方法

3 实验结果

3.1 复方烫伤膏对大鼠烫伤组织创面愈合率的影响

3.2 复方烫伤膏对大鼠烫伤创面组织含水量的影响

3.3 复方烫伤膏对大鼠烫伤创面病理组织学的影响

3.4 复方烫伤膏对大鼠烫伤创面组织血管内皮生长因子（VEGF）的影响

3.5 复方烫伤膏对大鼠烫伤创面组织微血管密度（MVD）的影响

3.6 复方烫伤膏对烫伤大鼠血清中丙二醛（MDA）含量的影响

3.7 复方烫伤膏对烫伤大鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响

3.8 复方烫伤膏对烫伤大鼠血清中TNF-a和IL-1水平的影响

4 讨论

4.1 大鼠深Ⅱ度烫伤模型的制备

4.2 复方烫伤膏对大鼠深Ⅱ度烫伤模型的保护作用

4.3 复方烫伤膏对大鼠深Ⅱ度烫伤模型的保护作用机制

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述及参考文献

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摘要

烧烫伤(burns/scalds)为临床常见病和多发病,是日常工作和生活中最常见的意外伤害之一。致病因素多种多样,严重程度取决于受伤组织的范围和深度,有较高的病死率,目前尚无特效治疗方法。复方烫伤膏(Fu fang tang shang gao, FFTSG)是名老中医祖传秘方,由黄柏、黄芪、黄芩等药物组成,具有化腐生肌、抗菌、消炎、止痛,促进组织细胞、表皮细胞再生等功效。本课题主要观察复方烫伤膏对大鼠深Ⅱ度烫伤模型的保护作用,并进一步探讨其可能的作用机制,为进一步促进复方烫伤膏在临床的推广应用及开发提供充足的理论和实验依据。主要实验结果如下:
　　1、FFTSG对大鼠深Ⅱ度烫伤模型的保护作用
　　采用浸入沸水的铁棒制备大鼠深Ⅱ度烫伤模型,并经病理组织学检查、鉴定为深Ⅱ度烫伤。烫伤30min后,烫伤大鼠单笼饲养,随机分组,给药组分别在烫伤部位涂相应的药物0.5g/只,每天一次,连续给药21天。分别在伤后不用时间点创面取材,测定药物对烫伤创面的创面愈合率、组织含水量及病理组织学的影响。
　　1.1FFTSG对大鼠深Ⅱ度烫伤组织创面愈合率的影响
　　采用描记称重法测定大鼠烫伤后24h、7d、14d、21d的创面愈合率。结果显示,FFTSG(0.4,0.2g浸膏.g生药-1)烫伤后7d创面愈合率明显升高;FFTSG(0.4,0.2,0.1g浸膏.g生药-1)烫伤后14d、21d创面愈合率明显升高。表明FFTSG对大鼠深Ⅱ度烫伤模型具有良好的保护作用,能明显促进创面愈合,并具有一定的量效、时效关系。
　　1.2FFTSG对大鼠深Ⅱ度烫伤组织组织含水量的影响
　　采用干湿法测定大鼠烫伤后24h、48h、7d、14d、21d的组织含水量。结果显示,FFTSG(0.4g浸膏.g生药-1)组烫伤后48h组织含水量有明显下降。烫伤后第7d、14d、21d,FFTSG(0.2,0.1g浸膏.g生药-1)中、低剂量组织含水量进一步下降。
　　1.3FFTSG对大鼠深Ⅱ度烫伤组织创面病理组织学的影响
　　分别于烫伤后24h、7d、14d、21d切取创面组织标本制成石蜡切片,HE染色,光镜观察创面修复情况。结果如下:模型组表现为表皮结构不完整,有水肿、坏死及炎性渗出,部分创面有表皮覆盖,胶原纤维束及成纤维细胞数较少;各用药组表现为表皮结构基本完整,可见创面部分或完全被表皮覆盖,胶原纤维及纤维细胞数量明显多于模型组,肉芽组织形成,毛囊增生,炎性渗出较少。随着时间延续,各用药组大鼠烫伤创面组织修复明显好转。
　　2、FFTSG对大鼠深Ⅱ度烫伤模型的保护作用机制
　　2.1FFTSG对大鼠深Ⅱ度烫伤组织创面血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)含量的影响
　　采用ELISA法测定大鼠烫伤后24h、48h、7d、14d、21d组织中VEGF含量。结果显示,在烫伤后第14d,FFTSG(0.4,0.2g浸膏.g生药-1)组创面VEGF含量显著增加。烫伤后第21d,FFTSG(0.4,0.2,0.1g浸膏.g生药-1)创面VEGF含量进一步升高。提示FFTSG促进烫伤创面组织愈合可能与增加创面组织VEGF含量有关。
　　2.2FFTSG对大鼠深Ⅱ度烫伤组织创面微血管密度(Microvascular density, MVD)的影响
　　采用免疫组织化学染色法测定大鼠烫伤后48h、7d、14d、21d组织中MVD。结果显示,烫伤后第7d,FFTSG(0.4,0.2g浸膏.g生药-1)组创面组织MVD显著升高。烫伤后第14、21d,FFTSG(0.4,0.2,0.1g浸膏.g生药-1)创面组织MVD均显著增加。提示FFTSG促进烫伤创面组织愈合可能与增加创面组织MVD有关。
　　2.3FFTSG的抗脂质过氧化作用
　　采用紫外分光光度法测定大鼠烫伤后24h、48h、7d血清中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性。结果显示,烫伤后48h,FFTSG(0.4,0.2g浸膏.g生药-1)组MDA含量显著下降,SOD活性明显升高;烫伤后第7d,FFTSG(0.4,0.2,0.1g浸膏.g生药-1)血清MDA含量进一步下降,SOD活性进一步提高。提示FFTSG具有抗脂质过氧化作用,这可能与其发挥烫伤创面的保护作用密切相关。
　　2.4FFTSG对大鼠深Ⅱ度烫伤血清中肿瘤坏死因子-a(Tumor necrosis factor-a,TNF-a)和白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1)水平的影响
　　采用ELISA法测定大鼠烫伤后24h、48h血清中TNF-a和IL-1水平。结果显示,烫伤后24h、48h,FFTSG(0.4,0.2,0.1g浸膏.g生药-1)大鼠血清TNF-a水平呈明显下降;烫伤后48h,FFTSG(0.4,0.2g浸膏.g生药-1)组血清中IL-1水平显著下降。提示FFTSG能够抑制炎症介质的释放,这可能是其促进烫伤创面组织愈合,发挥烫伤创面保护作用的重要机制。
　　结论:复方烫伤膏能明显促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合,减少创面组织含水量,改善创面病理组织学变化,显示出对大鼠深Ⅱ度烫伤模型具有良好的保护作用。其机制可能与增加烫伤创面组织VEGF合成和释放,促进创面微血管生成,降低烫伤大鼠血清MDA含量,提高SOD活力,抑制炎症介质TNF-a、IL-1水平的释放有关。

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