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大弹涂鱼主要组织相容性复合体(MHC)基因的鉴定与免疫应答研究

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摘要

第一章引言

1.1大弹涂鱼的研究综述

1.1.1大弹涂鱼的生物学简介

1.1.2大弹涂鱼养殖前景与国内外研究现状

1.2鱼类MHC基因的进化起源与研究进展

1.2.1 MHC基因的进化起源

1.2.2MHC Ⅰα基因的研究进展

1.2.3MHC Ⅱα基因的研究进展

1.2.4MHC Ⅱβ基因的研究进展

1.2.5MHC Ⅱγ基因的研究进展

1.3环境胁迫下鱼类MHC基因的免疫反应

1.4研究的目的与意义

第二章大弹涂鱼MHC Ⅰα基因序列及表达分析

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2实验方法

2.2结果

2.2.1大弹涂鱼MHC Ⅰα基因序列特征

2.2.2大弹涂鱼MHC Ⅰα基因系统发育分析

2.2.3大弹涂鱼MHC Ⅰα基因绝对定量反应体系的建立

2.2.4大弹涂鱼MHC Ⅰα基因mRNA在不同组织中的表达差异

2.3讨论

第三章大弹涂鱼MHC Ⅱα基因序列及表达分析

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2实验方法

3.2结果

3.2.1大弹涂鱼MHC Ⅱα基因序列特征

3.2.2大弹涂鱼MHC Ⅱα基因系统发育分析

3.2.3大弹涂鱼MHC Ⅱα基因绝对定量反应体系的建立

3.2.4大弹涂鱼MHC Ⅱα基因mRNA在不同组织中的表达差异

3.3讨论

第四章大弹涂鱼MHC Ⅱβ基因序列及表达分析

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2实验方法

4.2结果

4.2.1大弹涂鱼MHC Ⅱβ基因序列特征

4.2.2大弹涂鱼MHC Ⅱβ基因系统发育分析

4.2.3大弹涂鱼MHC Ⅱβ基因绝对定量反应体系的建立

4.2.4大弹涂鱼MHC Ⅱβ基因mRNA在不同组织中的表达差异

4.3讨论

第五章大弹涂鱼MHC Ⅱγ基因序列及表达分析

5.1材料与方法

5.1.1材料

5.1.2实验方法

5.2结果

5.2.1大弹涂鱼MHC Ⅱγ基因序列特征

5.2.2大弹涂鱼MHC Ⅱγ基因系统发育分析

5.2.3大弹涂鱼MHC Ⅱγ基因绝对定量反应体系的建立

5.2.4大弹涂鱼MHC Ⅱγ基因mRNA在不同组织中的表达差异

5.3讨论

第六章高盐胁迫下大弹涂鱼MHC Ⅰα、MHC Ⅱα、MHC Ⅱβ和MHC Ⅱγ基因对病毒拟似物poly(I∶C)的免疫反应

6.1材料与方法

6.1.1材料

6.1.2实验方法

6.2结果

6.2.2MHC Ⅱα基因mRNA在poly(I∶C)胁迫下的表达

6.2.3MHC Ⅱβ基因mRNA在poly(I∶C)胁迫下的表达

6.2.4MHC Ⅱγ基因mRNA在poly(I∶C)胁迫下的表达

6.3讨论

第七章高盐胁迫下大弹涂鱼MHC Ⅰα、MHC Ⅱα、MHC Ⅱβ和MHC Ⅱγ基因对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)的免疫反应

7.1材料与方法

7.1.1材料

7.1.2实验方法

7.2结果

7.2.2MHC Ⅱα基因mRNA鳗弧菌胁迫下的表达

7.2.3MHC Ⅱβ基因mRNA鳗弧菌胁迫下的表达

7.2.4MHC Ⅱγ基因mRNA鳗弧菌胁迫下的表达

7.3讨论

结论

参考文献

致谢

在读期间发表的学术论文及研究成果

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摘要

大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)是一种具有广阔市场前景的滩涂养殖经济鱼类,之前的研究表明,作为一种近岸穴居鱼类,大弹涂鱼以其独特的行为和许多适合两栖生活的生理生化特征成为鱼类中的一个特例,虽然栖息在环境复杂的潮间带泥滩,但却具有很强的抗病能力。因此,其能够适应多种恶劣环境的适应性免疫机制具有很高的研究价值。主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)是一类编码细胞表面糖蛋白的基因,在所有硬骨鱼的适应性免疫系统中起着至关重要的作用,而关于MHC基因的研究一直是鱼类分子免疫学和鱼类抗病辅助育种的研究热点之一。本研究旨在分析鉴定大弹涂鱼MHCⅠα、MHCⅡα、MHCⅡβ和MHCⅡγ基因序列;构建系统发生树分析大弹涂鱼MHC基因与其他已鉴定鱼类的进化关系;采用绝对荧光定量PCR技术,评估大弹涂鱼MHC基因的mRNA在健康个体的不同组织中的表达差异;采用相对荧光技术,研究在高盐胁迫下,分别注射鳗弧菌和病毒拟似物poly(I∶C)后MHCⅠα、MHCⅡα、MHCⅡβ和MHCⅡγ基因在机体主要免疫器官肝脏和脾脏中的表达情况。实验结果表明,大弹涂鱼MHCⅠα、MHCⅡα、MHCⅡβ和MHCⅡγ基因在大弹涂鱼的不同组织中均有表达,尽管表达水平不同。高表达主要集中发生在肝脏、鳃、肾脏、脾脏和肠道,可能是因为这些部位都是参与鱼类先天和适应性免疫反应的重要要部位,也是包括抗原呈递细胞在内的免疫细胞最多的部位。并且在面对恶劣环境时,大弹涂鱼的MHC基因会很快参与相关免疫,其表达量也会做出相对变化,证明大弹涂鱼的MHC基因参与其免疫表达并具有重要作用。

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