Pdx1、Ngn3、Sox9、Pax4和Nkx2.2不同组合重编程犬ADSCs成为IPCs的研究

声明

第一章 文献综述

1.1 糖尿病研究现状

1.2 干细胞治疗与糖尿病

1.2.1 胚胎干细胞与糖尿病

1.2.2 胰腺干细胞与糖尿病

1.2.3 肝脏干细胞与糖尿病

1.2.4 间充质干细胞与糖尿病

1.3 胰岛 β细胞发育相关基因的研究进展

1.3.1 胰十二指肠同源盒基因1（Pdx1）

1.3.2 神经元素3（Ngn3）

1.3.3 SRY盒基因9（Sox9）

1.3.4 配对盒同源基因4（Pax4）

1.3.5 NK转录因子相关同源盒基因家族2基因座位2（Nkx2.2）

1.3.6 ETS癌基因转录因子家族Fev基因（Fev）

1.3.7 GATA结合蛋白4基因（Gata4）

1.3.8 其他胰岛 β细胞发育相关基因

1.4 多基因共表达载体的研究进展

1.5 外源基因转染细胞技术的研究进展

1.6 研究的目的意义

第二章 Sox9、Fev和Gata4 分别转染诱导犬ADSCs 分化效果的比较

2.1 材料

2.1.1 主要试剂、菌株及仪器

2.1.2 试剂配制

2.2 方法

2.2.1 犬脂肪间充质干细胞的复苏

2.2.2 犬Sox9、Fev和Gata4基因的获取

2.2.3 Sox9、Fev和Gata4过表达真核载体的构建及转染

2.2.4 Sox9、Fev和Gata4过表达腺病毒载体的构建及转染

2.3 结果

2.3.1 犬脂肪间充质干细胞的复苏结果

2.3.2 犬Sox9、Fev和Gata4基因的PCR扩增结果

2.3.3 Sox9、Fev和Gata4过表达真核载体的构建及转染结果

2.3.4 Sox9、Fev和Gata4过表达腺病毒载体的构建及转染结果

2.4 讨论

2.4.1 真核表达载体与腺病毒表达载体效果比较

2.4.2 Sox9、Fev和Gata4基因过表达诱导效果比较

2.5 小结

第三章 多基因共表达腺病毒载体的构建

3.1 材料

3.1.1 主要试剂、菌株及仪器

3.1.2 试剂配制

3.2 方法

3.2.1 犬Pdx1、Ngn3、Sox9、Pax4和Nkx2.2基因的获取

3.2.2 腺病毒表达载体pAdTrack-CMV的扩增及双酶切

3.2.3 腺病毒穿梭载体的构建及鉴定

3.2.4 腺病毒骨架载体的构建与鉴定

3.2.5 腺病毒载体在293A细胞中的包装及过表达效果检测

3.2.6 腺病毒感染犬ADSCs后外源基因的表达效果检测

3.3 结果

3.3.1 目的基因PCR扩增结果

3.3.2 腺病毒穿梭载体重组克隆产物的鉴定结果

3.3.3 腺病毒骨架载体重组克隆产物的鉴定结果

3.3.4 腺病毒载体在293A细胞中的包装及过表达效果检测

3.3.5腺病毒感染犬ADSCs后外源基因的表达效果检测

3.4 讨论

3.5 小结

第四章 多基因共表达腺病毒感染犬ADSCs的诱导效果比较

4.1 材料

4.1.1 实验动物

4.1.2 主要试剂、菌株及仪器

4.1.3 试剂配制

4.2 方法

4.2.1 犬胰岛的分离培养与鉴定

4.2.2 多基因共表达腺病毒感染犬ADSCs后的诱导效果检测

4.3 结果

4.3.1 犬胰岛双硫腙染色鉴定结果

4.3.2 多基因共表达腺病毒感染犬ADSCs后的诱导效果检测

4.4 讨论

4.5 小结

结论

参考文献

附录

致谢

个人简历