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髓鞘碱性蛋白干扰RNA对人脑胶质瘤的影响

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前言

一 材料与方法

1.MBP RNA-siRNA 真核表达载体的构建

2人脑胶质瘤细胞系U251的体外培养及质粒的转染

二 实验结果

1酶切结果

2 在倒置荧光显微镜下观察MBP干扰RNA真核表达载体稳定转染结果

3 RT-PCR检测MBP基因表达

4 MTT法检测转染对胶质瘤U251细胞的增殖能力的影响

5划痕实验检测转染后对胶质瘤U251细胞迁移能力的影响

三 讨论

1胶质瘤分类及治疗进展

2 RNA干扰技术及其在胶质瘤治疗中的应用

3 MBP的功能及其对胶质瘤的影响

四 结论

参考文献

文献综述:髓鞘碱性蛋白概述及在临床中的应用

缩 略 语 表

读学位期间发表文章情况

个 人 简 历

致谢

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摘要

目的:讨论髓鞘碱性蛋白(MBP)干扰RNA(RNAi)对人脑胶质瘤的影响,即研究新靶点MBP干扰RNA对人脑胶质瘤U251细胞的增殖、浸润、转移等能力的相关影响,进而对胶质瘤的基因靶向治疗提供有力依据。  方法:构建4个新靶点的21.5KD MBP干扰 RNA的真核表达载体,分别对四个载体行双酶切和碱基排列测定的途径来判断载体构建是否成功,构建成功后,将RNA干扰载体转染至胶质瘤 U251细胞株,通过 RT-PCR的结果检测转染后21.5KD m RNA表达量,选出转染效果最高的一组作为实验组,同时设立未经任何处理的 U251人脑胶质瘤细胞为正常组(U251组)。对实验组及 U251组用 MTT法检测细胞增殖能力的变化,用细胞划痕实验检测侵袭能力的变化。  结果:1、21.5KD MBP干扰RNA真核表达载体构建成功,并成功转染入胶质瘤U251细胞中,倒置荧光显微镜下可观测到四组转染的细胞均可出现绿色荧光蛋白表达,从中选出转染效果最好的一个作为后续检测的实验组。2、RT-PCR检测到MBP RNAi成功。3、实验组细胞与 U251组相比增殖及侵袭能力减弱,MTT法检测细胞的增殖能力,结果有统计学意义(P均<0.05)。细胞划痕实验结果提示细胞侵袭能力减弱。  结论:新靶点21.5KD MBP干扰 RNA使MBP表达下调,从而导致人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭能力减弱。从而可以说明髓鞘碱性蛋白可以促进人脑胶质瘤的增殖及提高肿瘤的侵袭及浸润能力。通过对MBP表达的干扰,可能会对胶质瘤在临床治疗上起到帮助。

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