声明
第1 章 引言
1.1.1 概述
1.1.2 定向进化
1.1.3 理性设计
1.2 酶热稳定性研究
1.2.1 酶热稳定性影响因素
1.2.2 理性设计提高酶热稳定性策略
1.2.3 酶热稳定性研究意义
1.3 α-L-鼠李糖苷酶概述
1.3.1 α-L-鼠李糖苷酶性质
1.3.2 α-L-鼠李糖苷酶结构特征
1.3.3 α-L-鼠李糖苷酶的功能
1.3.4 α-L-鼠李糖苷酶热稳定性研究进展
1.4 本论文研究背景及意义
1.5 本论文研究内容
1.5.1 基于PoPMuSiC 预测的突变体构建和表达
1.5.2 精氨酸替换赖氨酸突变体构建和表达
1.5.3 多点突变体的构建和表达
第2 章材料与方法
2.1.1 菌株
2.1.2 主要试剂
2.1.3 常用溶液及培养基配制
2.1.4 主要实验仪器
2.1.5 PCR引物
2.2 实验方法
2.2.1 突变位点的选择
2.2.2 原始型 α-L-鼠李糖苷酶质粒的提取
2.2.3 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备
2.2.4 突变体质粒构建、转化、筛选及鉴定
2.2.5 突变体质粒线性化及回收
2.2.6 毕赤酵母感受态制备
2.2.7 电转化、筛选及鉴定
2.2.8 酵母基因组的提取及鉴定
2.2.9 突变体酶的诱导表达及分离纯化
2.2. 10 SDS -PAGE电泳 检测
2.2. 11 蛋白浓度的测定
2.2. 12 突变体酶酶学性质测定
2.2. 13 突变体酶微观结构 分析
2.2. 14 热稳定性显著提高突变体分析
第3 章基于PoPMuSiC 预测的突变体构建和表达
3.1 突变位点的选择
3.2 大肠杆菌 DH5α中突变体的构建
3.3 真核表达
3.4.1 pNP标准曲线
3.4.2 单点突变体酶学性质
3.4.3 双点突变体酶学性质
3.5 突变体微观结构变化
3.6 K573V-E631F突变体结构分析
3.6.1 圆二色谱分析
3.6.2 荧光光谱分析
3.6.3 分子动力学模拟
3.7 本章小结
第4 章 精氨酸替换赖氨酸突变体构建和表达
4.1 突变位点的选择
4.2 大肠杆菌 DH5α中突变体的构建
4.3 真核表达
4.4 突变体酶学性质
4.4.1 单点突变体酶学性质
4.4.2 多点突变体酶学性质
4.5 突变体微观结构变化
4.6 K406R-K573R 突变体结构分析
4.6.1 圆二色谱分析
4.6.2 荧光光谱分析
4.6.3 分子动力学模拟
4.7 本章小结
第5 章多点突变体的构建和表达
5.1 突变位点的选择
5.2 大肠杆菌 DH5α中多点突变体的构建
5.3 真核表达
5.4 突变体酶学性质
5.5 突变体微观结构变化
5.6.1 圆二色谱分析
5.6.2 荧光光谱分析
5.6.3 分子动力学模拟
5.7 本章小结
第6 章结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致 谢
参考文献
在学期间发表的学术论文
集美大学;
