布氏鼠耳蝠(Myotis brandtii)免疫抑制多肽对银屑病动物模型的治疗研究

声明

摘要

第一章绪论

1银屑病

1．1银屑病概述

1．2银屑病发病机理

1．3银屑病的治疗

2免疫抑制剂

2．1免疫抑制剂概述

2．2免疫抑制剂的临床应用

2．3免疫抑制剂的副作用

第二章布氏鼠耳蝠唾液腺活性多肽MTX的原核表达及活性研究

1引言

2材料与方法

2．1表达菌株的构建

2．2MTX融合蛋白的诱导

2．3超声破碎

2．4镍离子亲和层析纯化融合蛋白

2．5融合蛋白的甲酸切割和脱盐

2．6RP-HPLC分离纯化

2．7MTX的Trypsin抑制活性检测

2．8MTX质谱检测分子量

2．9MTX对LPS刺激中性粒细胞的影响检测

2．10MTX的LTA4H抑制活性检测

3实验结果与分析

3．1MTX融合蛋白的序列及载体构建

3．2融合蛋白MTX原核表达的诱导结果

3．3MTX超声破碎后沉淀上清电泳鉴定结果

3．4镍柱纯化后MTX融合蛋白挂柱效果鉴定

3．5MTX甲切纯化后电泳鉴定

3．6HPLC各峰收集液的活性检测

3．7MTX的分子量鉴定

3．8MTX对LPS刺激中性粒细胞的影响

3．9MTX的LTA4H抑制活性检测

4本章讨论

第三章MTX安全性评价和药代动力学检测

1引言

2材料与方法

2．1溶血活性检测

2．2细胞毒性检测

2．3MTX半衰期测定

3实验结果与分析

3．1MTX无溶血活性

3．2MTX无HaCat和HepG2细胞毒性

3．3MTX的半衰期

4本章讨论

第五章MTX对银屑病动物模型的治疗

1引言

2材料与方法

2．1银屑病患者血浆LTA4H含量测量

2．2银屑病小鼠的给药处理

2．3ELISA检测小鼠血浆中各炎症因子含量水平

2．4RT-PCR检测小鼠病变部位各炎症因子表达水平

2．5小鼠耳部和背部组织HE染色

2．6Western blot检测病变组织中相关因子含量变化

3数据统计与分析

4实验结果与分析

4．1银屑病患者血浆LTA4H含量上调

4．2银屑病小鼠给药处理结果

4．3银屑病小鼠血浆炎症因子测量结果

4．4银屑病小鼠组织中各因子表达情况

4．5银屑病小鼠组织HE染色

4．6银屑病小鼠组织western blot结果

5本章讨论

全文讨论

全文总结

参考文献

附录

致谢