山东省茄科、葫芦科主要作物病毒鉴定及ToMMV侵染性克隆构建

声明

论文说明

符号说明

摘要

1前言

1．1茄科病毒病的简介

1．1．1烟草花叶病毒

1．1．2黄瓜花叶病毒

1．1．3苜蓿花叶病毒

1．1．4番茄褪绿病毒

1．1．5番茄黄化曲叶病毒

1．1．6番茄斑驳花叶病毒

1．1．7南方番茄病毒

1．2葫芦科病毒病的简介

1．2．1小西葫芦黄花叶病毒

1．2．2西瓜花叶病毒

1．2．3黄瓜绿斑驳花叶病毒

1．2．4番木瓜环斑病毒

1．2．5瓜类褪绿黄化病毒

1．2．6瓜类蚜传黄化病毒

1．3茄科、葫芦科病毒病检测技术研究概况

1．3．1生物学检测法

1．3．2血清学检测法

1．3．3电镜检测法

1．3．4分子生物学检测法

1．4病毒病的综合防治措施

1．5研究目的与意义

2材料与方法

2．1试验材料与使用仪器

2．1．1样品采集

2．1．2试验试剂与耗材

2．1．3试验仪器

2．1．4试验试剂的配制

2．2RNA病毒检测与鉴定

2．2．1RNA提取

2．2．2引物设计与合成

2．2．3反转录cDNA合成

2．2．4PCR扩增

2．2．5PCR产物的克隆和测序

2．3DNA病毒检测与鉴定

2．3．1DNA提取

2．3．2引物设计与合成

2．3．3PCR扩增

2．3．4PCR产物克隆及测序

2．4ToMMV全基因组扩增

2．4．1RNA提取

2．4．2引物设计与合成

2．4．3反转录

2．4．4ToMMV全基因组PCR扩增

2．4．5PCR产物的克隆及测序

2．4．6序列分析

2．5．35‘RACE构建

2．5．4加d(G)尾

2．5．5巢式PCR扩增

2．5．6PCR产物克隆及测序

2．5．7序列分析

2．6ToMMV 3’RACE

2．6．2引物设计与合成

2．6．3加d(A)尾及反转录

2．6．4巢式PCR扩增

2．6．5PCR产物克隆及测序

2．6．6序列分析

2．7．2引物设计与合成

2．7．335s启动子控制下的侵染性克隆

2．7．4同源重组

2．8农杆菌浸润接种

2．9接种烟草RT-PCR检测

3结果分析

3．1山东省茄科、葫芦科DNA病毒病原检测结果

3．1．1山东省茄科、葫芦科植物DNA病毒病原检测情况

3．1．2山东省茄科、葫芦科植物DNA病毒病原检出率

3．2山东省茄科、葫芦科植物RNA病毒病检测结果

3．2．1山东省茄科、葫芦科植物RNA病毒病原检测情况

3．2．2山东省茄科植物RNA病毒病检出率

3．2．3山东省葫芦科植物RNA病毒病检出率

3．2．4山东省茄科植物病毒病复合侵染情况

3．2．5山东省葫芦科植物病毒病复合侵染情况

3．2．6山东省部分地区茄科病毒病分布情况

3．2．7山东省部分地区葫芦科病毒病分布情况

3．3ToMMV全基因组扩增及序列分析

3．3．1ToMMV全基因组扩增

3．3．2ToMMV全基因组序列分析

3．3．3ToMMV全基因组相似性分析

3．3．4ToMMV山东分离物的系统进化分析

3．4ToMMV侵染性克隆构建及侵染性鉴定

3．4．1ToMMV目的基因获取

3．4．2ToMMV侵染性克隆鉴定

4讨论

4．1山东省茄科、葫芦科作物病毒病的检测

4．2番茄斑驳花叶病毒全基因组序列分析

4．3番茄斑驳花叶病毒侵染性克隆构建

5结论

参考文献

附录

致谢