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Th17/Treg失衡机制在哮喘肾气虚证中的特征表达及益肾喘宁汤干预研究

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目的：　　1．建立支气管哮喘肾气虚证大鼠模型；　　2．基于分子生物学、免疫学等研究技术与方法，整体阐释支气管哮喘肾气虚证可能发生的机制及验方益肾喘宁汤的疗效机制，以期为指导临床用药提供更加有利的实验依据。　　方法：　　1．采用多因素复合模拟中医病因并结合卵清蛋白致敏和雾化激发的方法建立支气管哮喘肾气虚证模型；　　2．清洁级Wistar大鼠随机分为正常组、哮喘组、肾哮组、西药组及中药组，每组10只。连续造模14天后，药物组分别给予相应药物。酶联免疫吸附测定法检测BALF中IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β1浓度，探讨益肾喘宁汤对哮喘肾气虚证炎性细胞因子表达的影响；　　3．免疫印迹法检测肺组织中转录因子Foxp3、RORγt、TGF-β、IL-6蛋白的表达，根据益肾喘宁汤对免疫标志物的影响，探讨中药治疗支气管哮喘肾气虚证的可能疗效机制。　　结果：　　1．成功复制支气管哮喘肾气虚证大鼠模型；　　2．与正常对照组相比，哮喘组和肾哮组BALF中IL-6、IL-17均见升高，IL-10、TGF-β1均见下降(P＜0.05)。其中，肾哮组IL-17、IL-10和TGF-β1与哮喘组比较，变化明显，两组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。与肾哮组比较，各给药组IL-6、IL-17均见下降，IL-10、TGF-β1均升高（P＜0.05）。与西药组相比，中药组IL-17、IL-10变化明显，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　3．与正常对照组相比，哮喘组和肾哮组肺组织TGF-p、RORγt、IL-6蛋白表达均升高，Foxp3蛋白表达下降(P＜0.05)。其中，肾哮组Foxp3蛋白表达水平与哮喘组比较，变化明显，两组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。与肾哮组比较，各给药组Foxp3蛋白表达水平升高（P＜0.05），IL-6、TGF-β、RORγt蛋白表达降低（P＜0.05）。与西药组相比，中药组TGF-β、RORγt、Foxp3变化显著，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：　　1．采用多因素复合模拟中医病因并结合卵清蛋白致敏和雾化激发的方法建立支气管哮喘肾气虚证模型稳定可靠；　　2．在哮喘肾气虚证中存在Treg与Th17的失衡，表现为相关细胞因子IL-6、IL-17的增高、IL-10、TGF-β1的降低及转录因子TGF-β、RORγt、IL-6、Foxp3蛋白水平的异常表达，充分反映哮喘肾气虚证的免疫失衡，Treg与Th17的失衡很可能是哮喘肾气虚证气道炎症形成的重要原因之一，肾气虚可以加重哮喘大鼠气道和肺组织炎症反应，并且是通过影响相关细胞因子、转录因子的特征表达来实现的。　　3．益肾喘宁汤能通过调节失衡的Th17细胞、Treg细胞及相关细胞因子、转录因子的表达，改善肾气虚证哮喘大鼠的免疫紊乱状态，恢复肾气虚证哮喘大鼠的免疫耐受。　　4．从整体上阐释了支气管哮喘肾气虚证发生过程免疫学特征及机制；从整体和系统的层面揭示了益肾喘宁汤对支气管哮喘肾气虚证调节作用的疗效机制，显示了益肾喘宁汤多通路、多靶点的综合治疗特色。

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