2009甲型H1N1流感病毒与普通季节性流感病毒感染细胞效率的比较

图表目录

英语缩略词表

前言

1 实验材料

1.1实验动物

1.2实验试剂

1.2.1 质粒

1.2.2 菌株

1.2.3 病毒株

1.2.4 细胞株

1.2.5 主要化学试剂

1.2.6 试剂与耗材

1.2.7 试剂盒

1.2.8 主要抗体

1.2.9 E.coli用培养基的配制

1.2.10 制备感受态细胞的相关溶液

1.2.11 抗生素的配制

1.2.12 大量提取质粒DNA的相关溶液

1.2.13 DNA琼脂糖凝胶电泳缓冲液及凝胶的配制

1.2.14 细胞冻存液的配制

1.2.15 细胞裂解液的配制

1.2.16 SDS—PAGE蛋白质电泳及相关缓冲液的配制

1.2.17 蛋白纯化相关缓冲液配制

1.2.18 常用缓冲液的配制

1.2.19 鸡血细胞溶液的制备

1.2.20 血凝单位抗原的配制

1.3 主要仪器及设备

2 实验方法

2.1 病毒接种回收及滴度测定

2.1.1 鸡胚的孵育及检卵

2.1.2 H1N1病毒鸡胚接种方法

2.1.3 鸡胚尿囊液收毒

2.1.4 回收病毒血凝效价测定

2.1.5 病毒滴度(TCID50)测定

2.2 贴壁细胞的培养

2.3 稳定表达细胞株的构建

2.4 细胞冻存

2.5 细胞复苏

2.6 细胞裂解

2.7 用流感病毒感染细胞Western Blotting检测样品处理

2.8 蛋白纯化

2.9 用流式细胞术检测表达蛋白的活性

2.10 Western Blotting的检测方法

2.11 流感病毒感染细胞实验

2.12 流感病毒感染细胞后的免疫荧光检测

2.13 MTT检测

3 实验结果

3.1 病毒在鸡胚中的扩增及滴度测定

3.2 H1N1病毒在细胞中的感染及其检测工作

3.2.1 观察Seasonal H1N1及Swine-origin H1N1感染细胞

3.2.2 免疫荧光检测两种病毒在A549、Hep-2、CNE-2Z、H1650和MRC-5细胞中的感染效率差异

3.2.3 免疫荧光检测不同滴度Swine-origin H1N1在A549、Hep-2、CNE-2Z、H1650和MRC-5细胞中的感染效率差异

3.2.4 不同滴度病毒感染5种细胞后感染效率的差异检测

3.3 Seasonal H1N1病毒感染细胞后不同抗体的24 h免疫荧光实验

3.4 Seasonal H1N1病毒在不同时间点感染细胞后的分布

3.5 胰酶对病毒感染细胞效率的影响

3.6 MTT检测细胞的活性

3.7 抑制因子对病毒侵入细胞抑制率的影响

3.7.1 病毒在A549细胞中的感染蛋白抑制试验

3.7.2 7种抑制因子对病毒侵入细胞抑制率的检测

讨论

参考文献

致谢

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