论文说明:英文名词及缩写
前言
一、载脂蛋白基因簇
二、载脂蛋白ApoAI/CⅢ/AIV/AV基因簇的结构与功能
三、ApoAI/CⅢ/AIV/AV基因簇基因功能的转基因动物研究
四、ApoAI/CⅢ/AIV/AV基因簇的基因表达调控研究
五、本研究的主要内容
材料与方法
一、材料
1.含入载脂蛋白apo AI / CIII/AIV/AV/基因簇的BAC克隆
2.菌株与质粒
3.实验用小鼠及高脂饲料
4.限制性内切酶及修饰酶
5.其它主要试剂
6.放射性核素
7.主要仪器设备
二、实验方法
1.BAC介导的人载脂蛋白apoAI/CII/AIV/AV基因簇突变株转基因小鼠的基本技术路线(Fig.5)
2.利用同源重组[Yang XW 1997]从包含完整人载脂蛋白apoAI/CIII/AIV/AV基因簇的BAC DNA中删除apoCⅢ增强子核心序列
3.显微注射用BAC DNA的制备与纯化
4.受精卵培养基的配制与保存
5.小鼠的选择与处理
6.超排卵和取卵
7.显微注射
8.输卵管移卵
9.鼠尾基因组DNA的提取
10.利用PCR和Southern杂交鉴定转基因鼠
11.小鼠器官组织的采集和保存
12.转基因小鼠传代
13.组织RNA提取
14.RNase保护实验检测转基因小鼠中人载脂蛋白转基因的表达
15.小鼠血脂水平的测定
16.小鼠冠脉血管动脉粥样硬化斑块形成的检测
17.高脂饲料对转基因小鼠ApoAI基因簇基因表达水平调节的检测
实验结果
一、利用同源重组从含完整人apoAI/CⅢ/AIV/AV基因簇的BAC286I4 DNA中定位删除apo CⅢ增强子核心序
1.用于重组的穿梭载体pSV-RecA-△CⅢ enhancer的构建
2.穿梭载体在含BAC286I4大肠杆菌细胞中的同源重组和重组体的正负筛选
3.利用Southern杂交和序列测定鉴定BAC286I4的突变体
二、显微注射用BAC DNA的制备与纯化
三、ApoAI/CⅢ/AIV/AV基因簇突变转基因小鼠株系的建立
四、比较正常与突变ApoAI基因簇转基因小鼠中各apo基因的表达
1.正常转基因小鼠中各apo基因的表达
2.突变转基因小鼠中各apo基因的表达
五、正常ApoAI/CⅢ/AIV/AV基因簇转基因小鼠模型的研究
1.转基因小鼠血脂水平
2.高脂饲料诱导后对照组与转基因组小鼠冠脉血管切片
3.高脂饲料对转基因小鼠中人apo基因表达的影响
讨论
一、包含人类基因组DNA片段的BAC克隆用于转基因动物研究
二、人ApoAI/CⅢ/AIV/AV基因簇的表达调控与apoCⅢ增强子的作用
1.人apo基因在ApoAI簇转基因小鼠体内显示正常的组织特异性表达
2.ApoAI簇基因在正常转基因鼠内呈现整合位点非依赖性和近似拷贝数依赖性的表达模式
3.apoCⅢ增强子整体内调控apoAI、CⅢ、AIV的肝肠组织特异性表达
4.apoCⅢ增强子不调控远端apoAV基因的表达
5.ApoCⅢ增强子与LCR的比较
三、ApoAI/CⅢ/AIV/AV基因簇与脂类代谢及相关疾病
1.ApoCⅢ对甘油三酯代谢的抑制作用似强于apoAV的促进作用
2.ApoAI基因簇对胆固醇代谢的综合调节作用
3.高脂饲料诱发ApoAI簇转基因小鼠HDL胆固醇含量显著升高
4.小鼠遗传背景与动脉粥样硬化易感性
5.高脂饮食对于肝肠apo基因表达的不同调控
四、本研究的不足与改进
五、载脂蛋白、脂类代谢以及动脉粥样硬化的研究方法展望
小结
参考文献
文献综述
Abstract
INTRODUCTION
TISSCE-SPECIPICCOREGULATIONINTHETWOGENECLUSTERS
UNIQUEPROPERTIESINTRANSCRIPTIONALREGULATIONOFTHEAPOEGENECLUSTER
TRANSCRIPTIONALREGULATIONOFTHEGENESTHETWOCLUSTERSBYEXTRACELLULARFACTORS
PERSPECTIVESANDTHEEWINDINGOFAPOAV
REFERENCES
致谢
个人简历
