HIV-1 CN54株Gag P55和P24蛋白的高效表达、纯化和鉴定无抗生素标记质粒DNA扩增系统的构建

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获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS艾滋病)由人免疫缺陷病毒HIV所引起.二十年来,艾滋病肆虐全球成为世界上危害人类健康和生命安全最严重的病毒性疾病之一.本研究第一部分内容是利用大肠杆菌表达系统高效表达并纯化HIV-1中国株CN54 Gag P55和P24重组蛋白,为HIV疫苗和诊断试剂研究和开发创造条件.结论:利用原核表达系统实现了HIV-1 CN54 GagP55和P24抗原蛋白高效非融合表达,纯化后目的蛋白具有良好抗原性,可用于艾滋病基础研究和临床检验.本研究的第二部分内容是无抗生素的质粒扩增系统的构建.为了消除抗生素抗性基因在环境中扩散和质粒生产工艺中残留抗生素的潜在威胁,本研究通过改造宿主菌的基因组,利用质粒lac启动子阻遏滴定的原理,获得一种能够稳定保存和扩增无抗生素标记DNA质粒的宿主菌.结论:建立了一种简便快速的方法对RecA缺陷的大肠杆菌株染色体进行编辑,根据阻遏蛋白滴定原理利用该同源重组方法构建了一种新宿主菌,该菌株可用于扩增以lac操作子替代抗生素抗性基因的质粒.

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作者
王道毅;
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作者单位

北京协和医学院;

中国医学科学院;

清华大学医学部;

中国协和医科大学;

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授予单位北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;中国协和医科大学;
学科生物化学和分子生物学
授予学位硕士
导师姓名陈静娴,邵一鸣;
年度 2004
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类免疫学技术、设备及实验方法;获得性免疫缺陷综合征（AIDS艾滋病）;
关键词
HIV-1; Gag; P55; P24; 大肠杆菌; 表达; 纯化; DNA疫苗; 抗生素标记; 染色体编辑; 阻遏蛋白滴定;

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1. HIV-1 CN54 Gag P55和P24蛋白的高效表达、纯化和鉴定 [J] . 王道毅 ,刘勇 ,郝彦玲 . 中国输血杂志 . 2004,第1期
2. 酵母表达的HIV-1中国株CN54 Gag蛋白的免疫原性研究 [J] . 郝彦玲 ,马民强 ,李海山 . 免疫学杂志 . 2004,第3期
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7. HIV-1核心抗原p24基因的表达、纯化、鉴定及应用性研究 [A] . 刘华琴 . 2013

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