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BRAF基因突变及CK19、Galectin-3、TRβ1、B-raf蛋白表达在甲状腺乳头状癌病理诊断及预后中的意义

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前言

第一部分：BRAF基因突变在甲状腺乳头状癌诊断中的价值及其与PTC预后关系的临床病理学研究

材料与方法

1.材料

2.主要实验试剂

3.主要实验仪器

4.试剂配制

5.实验方法

6. 统计学方法

结果

讨论

结论

第二部分： CK19、Galectin-3、TRβ1、B-raf蛋白与甲状腺乳头状癌诊断及其预后关系、与BRAF突变相关性的临床病理学研究

材料与方法

1.材料

2.实验试剂

3.主要实验仪器

4.实验方法

5.统计方法

结果

讨论

结论

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摘要

目的:
　　探讨甲状腺乳头状病变中CK19、Galectin-3、TRβ1、B-raf蛋白表达及BRAF基因突变的差异及其意义。
　　方法:
　　第一部分:甲状腺良性乳头状增生有时与甲状腺乳头状癌鉴别困难,文献报道前者BRAF基因突变明显低于后者。另外,BRAF基因突变是否与PTC的临床预后、组织学分期以及其他病理学参数包括肿瘤数目、大小、组织学类型等相关也是研究的热点。本研究通过 RT-PCR扩增方法检测了101例甲状腺乳头状病变中 BRAF基因的突变情况,分析BRAF基因突变在鉴别PTC和PTH中的价值,以及该基因突变的临床病理联系。
　　第二部分:本部分选取甲状腺乳头状癌151例,乳头状增生70例,然后应用免疫组化方法检测其中CK19、Galectin-3、TRβ1、B-raf蛋白的表达情况。并分析它们的表达在甲状腺乳头状病变中的鉴别诊断意义。同时,对乳头状癌病例的某些临床病理学参数与这些蛋白表达之间的关系也进行了细致探讨。有关BRAF基因突变是否与上述蛋白表达之间存在某些相关性也是本部分的研究内容。
　　结果:
　　第一部分:
　　1.BRAF在PTC和PTH中的突变率分别为60.6％(40/66)、0(0/35),经统计学证明,差异具有显著性(p<0.0001)。
　　2. BRAF基因突变率与 PTC患者的性别、肿瘤大小无明显相关性;年龄高于45岁组的突变率为86.2%(25/29),显著高于年龄低于45岁组(40.5%,p=0.0004);肿瘤多发患者与肿瘤单发患者BRAF的突变率分别为84.6%(22/26)、45.0%(18/40),差异具有显著性(p=0.0031);在淋巴结转移组的突变率明显高于淋巴结无转移组(分别为73.8%、31/42;37.5%、9/24;p=0.0082);肿瘤分期Ⅰ-Ⅱ期组患者BRAF基因突变率(52.0%,26/50)显著低于Ⅲ-Ⅳ期组患者(87.5%,14/16)(p=0.0254)。
　　3.BRAF在PTC不同组织学亚型中的突变率不同:高细胞亚型(85.7%)>嗜酸细胞亚型(77.8%)>经典型(66.7%)>乳头状微小癌(61.1%)>滤泡亚型(18.2%),差异具有显著性(p=0.0208)
　　第二部分:
　　1.CK19在PTC和PTH中的表达率分别为96.0%(145/151)、37.1%(26/70);Galectin-3在PTC和PTH中的表达率分别为94.7%(143/151)、25.7%(18/70);、TRβ1在PTC和PTH中的表达率分别为20.5%(31/151)、95.7%(67/70);B-raf在 PTC和 PTH中的表达率分别为84.8%(128/151)、81.4%(57/70)。CK19、Galectin-3、TRβ1在PTC组和PTH组中的表达具有显著性差异(p<0.05);B-raf在甲状腺乳头状癌组和PTH组中的表达无明显差异(p>0.05)。
　　2.CK19、Galectin-3、TRβ1以及B-raf四种抗体CK19的敏感性最高(96.0%), TRβ1的特异性最高(95.7%)。联合应用上述抗体可以显著提高甲状腺乳头状癌诊断的准确性。
　　3. TRβ1及B-raf在PTC中的表达与患者的某些临床病理学参数如肿瘤大小、肿瘤数目、淋巴结有无转移、性别、年龄、以及肿瘤分期均无明显相关性(p>0.05);Galectin-3在PTC中的表达与淋巴结转移(p=0.0404)、肿瘤分期相关(p=0.0113);但与其他临床病理学参数如肿瘤数目、肿瘤大小以及患者的性别、年龄关系不大(p均>0.05)。
　　4.PTC中CK19、Galectin-3、TRβ1及B-raf四种蛋白表达与BRAF突变均无明显相关性(p均>0.05)。
　　结论:
　　第一部分:
　　1.PTC患者的BRAF基因突变率明显高于乳头状增生,BRAF基因突变检测可以作为鉴别甲状腺良、恶性乳头状病变的重要辅助指标。
　　2.BRAF基因突变与PTC患者的某些临床病理学参数相关,主要包括年龄、淋巴结有否转移、肿瘤多发性、临床分期以及组织学亚型,提示BRAF突变患者预后较无突变者差。
　　第二部分:
　　1.CK19在甲状腺乳头状癌诊断中有较高的敏感性,相比Galectin-3更敏感;但其特异性低于Galectin-3。
　　2.TRβ1在甲状腺乳头状癌中的阳性率明显高于乳头状增生,有较高的诊断特异性,其诊断特异性高于CK19和Galectin-3。
　　3.B-raf在PTC和PTH的表达无显著差异。
　　4.CK19、Galectin-3、TRβ1及B-raf四种蛋白的表达与BRAF基因突变无明显相关性(P>0.05)。
　　5.TRβ1及B-raf表达与患者的肿瘤大小、数目、有无淋巴结转移、性别、年龄、以及肿瘤分期均无明显相关性(p>0.05);Galectin-3在PTC中的表达与淋巴结转移(p=0.0404)、肿瘤分期相关(p=0.0113);但与其他临床病理学参数包括肿瘤数目、肿瘤大小以及患者的性别、年龄无明确相关性(p均>0.05)。

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