骨髓间充质干细胞的成肌腱分化促进肌腱愈合的实验研究

代理获取

页面导航

目录
摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

背景：
　　肌腱损伤在日常生活及运动领域十分常见，由于肌腱组织解剖结构特殊，其内血管供给较少，自身修复愈合能力较差，愈合后容易出现瘢痕及钙化等并发症。骨髓间充质干细胞(BMSCs)已开始用于促进肌腱修复的研究，但有部分病例存在异位钙化并发症及干细胞形成肿瘤的风险等。因此，本课题组提出，采用生长因子体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)成肌腱分化后，体外构建干细胞肌腱替代生物材料用于肌腱损伤的修复。
　　目的：
　　1、分离培养及鉴定骨髓间充质干细胞(BMSCs)。
　　2、研究生长因子对骨髓间充质干细胞成肌腱分化的调控及最佳条件。
　　3、体外构建干细胞肌腱替代生物材料。
　　4、研究干细胞肌腱替代生物材料是否能促进肌腱缺损愈合。
　　方法：
　　1、采用密度梯度离心法分离培养绿荧光大鼠BMSCs，流式细胞仪技术和成骨、成软骨、成脂肪分化实验进行鉴定。
　　2、取第3代的BMSCs，加入不同浓度的生长分化因子6（GDF-6），生长分化因子7（GDF-7）和结缔组织生长因子（CTGF），体外诱导培养2周后，实时荧光定量PCR检测scleraxis和tendomodulin基因mRNA的表达。根据PCR结果筛选出每个生长因子的最佳浓度。免疫细胞化学染色检测tendomodulin、tenascinC和I型胶原的表达；Westernblotting检测tendomodulin蛋白的表达。筛选出生长因子调控BMSCs体外成肌腱分化的最佳条件。
　　3、取第3代的BMSCs，诱导成肌腱分化2周后，体外构建干细胞肌腱替代生物材料植入裸鼠皮下，12周后取材，进行组织形态学检测。
　　4、动物模型：SD大鼠髌腱缺损模型。将BMSCs和干细胞肌腱替代生物材料分别填充髌腱缺损处，对照组不植入任何细胞或材料。术后2、4、6周取材，进行组织形态学。术后4周取材，进行生物力学分析。
　　结果：
　　1、流式细胞仪结果显示，本实验分离培养的BMSCs，CD90、CD44表达阳性，CD31、CD34表达阴性，并具有成骨、成软骨和成脂肪分化的多向分化能力。
　　2、实时荧光定量PCR、免疫细胞化学染色和Westernblotting结果显示，CTGF（25ng/ml）和GDF-6（20ng/ml）能显著增加tenomodulin和scleraxis的mRNA表达（p<0.05）及tenomodulin、tenascinC和I型胶原的蛋白表达。
　　3、组织形态学分析结果显示，干细胞肌腱替代生物材料可在裸鼠体内形成肌腱样组织，其胶原纤维染色呈红色，密集平行排列，细胞沿张力方向纵行排列于胶原纤维之间。
　　4、组织形态学分析结果显示，干细胞肌腱替代生物材料组在各个时间点的愈合情况明显好于BMSCs组和对照组，细胞明显减少，胶原纤维明显增多且排列趋向平行。生物力学分析结果显示，干细胞肌腱替代生物材料组的最大应力和弹性模量显著大于BMSCs组和对照组（p<0.05）。
　　结论：
　　1、经鉴定，本实验分离培养的BMSCs具有多向分化能力，并表达间充质干细胞特异性表面标记物。
　　2、GDF-6，GDF-7和CTGF三种生长因子均能诱导BMSCs成肌腱分化，其中CTGF25ng/ml和GDF-620ng/ml两种条件分化效果更好。
　　3、BMSCs在体外经过CTGF（25ng/ml）诱导成肌腱分化后，可在体外构建干细胞肌腱替代生物材料。该材料在裸鼠体内可形成肌腱样组织。
　　4、经过成肌腱分化过程构建的干细胞肌腱替代生物材料，可显著促进大鼠髌腱损伤的愈合及功能性修复。

著录项

作者
倪明;
展开▼
作者单位

解放军总医院;

解放军医学院;

军医进修学院;

展开▼
授予单位解放军总医院;解放军医学院;军医进修学院;
学科外科学(骨外)
授予学位博士
导师姓名王岩,李刚;
年度 2011
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类腱、腱鞘、腱膜疾病;
关键词
肌腱损伤; 骨髓间充质干细胞; 生长因子; 成肌腱分化; 功能性修复; 干细胞肌腱;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 带蒂筋膜脂肪瓣促进肌腱愈合防止肌腱粘连的实验研究 [J] . 左强 ,章征源 ,张桦 . 南昌大学学报（医学版） . 2006,第002期
2. 慢性腱病模型大鼠肌腱干细胞体外成脂和成肌腱的分化能力 [J] . 陈辉 ,林禹丞 ,徐宏亮 . 中国组织工程研究 . 2014,第045期
3. 慢性腱病模型大鼠肌腱干细胞体外成脂和成肌腱的分化能力 [J] . 陈辉 ,林禹丞 ,徐宏亮 . 中国组织工程研究 . 2014,第045期
4. 骨髓间充质干细胞及其复合物对肌腱早期愈合影响的实验研究 [J] . 韩桂全 ,唐述森 ,刘晓伟 . 中国矫形外科杂志 . 2009,第9期
5. 骨髓间充质干细胞对肌腱移植物在骨隧道内愈合效果及示踪的实验研究 [J] . 董佩龙 ,吴小涛 ,李永刚 . 中国矫形外科杂志 . 2009,第4期
6. 血小板源性生长因子BB表达对促进大鼠肌腱愈合和防止肌腱粘连的作用 [C] . 林樾 ,梁红伟 ,李云剑 . 中华医学会第二届全国创伤与危重病感染学术会议 . 2010
7. 分米波促进肌腱愈合预防肌腱粘连的生物力学分析 [A] . 罗健 . 2008

骨髓间充质干细胞的成肌腱分化促进肌腱愈合的实验研究

目录

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅