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一种新型木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

         

摘要

为了获得新型木聚糖酶的高效分泌表达,在工程酶项目组前期原核表达了木聚糖酶基因xynA的基础上,将xynA基因(GenBank登录号:U57819)编码耐热性木聚糖酶成熟蛋白的部分序列克隆到pPICZαA表达载体上,转化毕赤酵母X33,成功构建真核表达体系,再分批加入0.5%(V/V)甲醇诱导毕赤酵母工程菌株产胞外木聚糖酶.结合木聚糖酶活力检测、SDS-PAGE电泳和Western Blot分析胞外木聚糖酶表达情况.结果表明,该XynA含有典型的糖苷水解酶11类催化结构域(GH11),成熟蛋白的预测分子量为38.6 ku,等电点为6.86;7个毕赤酵母基因工程菌株X33/pPICZαA-xynA分泌的木聚糖酶活力均≥300 U/mL,最高达487.2 U/mL;胞外木聚糖酶在SDS-PAGE和Western Blot检测的特征谱带分子量约为45 ku,均比预期分子量(38.6 ku)略大.一种新型木聚糖酶获得了高效分泌表达,为进一步分离纯化,研究其性质、结构和功能奠定了基础.

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