拟南芥AtTCP4基因克隆及原核表达

雷其冬; 孙旭东; 徐慧妮

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拟南芥AtTCP4基因克隆及原核表达

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为进一步研究转录因子TCP4在植物生长发育过程中的调控作用和下游靶基因.利用生物信息学分析转录因子TCP4家族及其蛋白序列,扩增AtTCP4基因CDS序列、构建原核表达载体并诱导纯化获得蛋白,利用凝胶电泳迁移试验(EMSA)验证AtTCP4蛋白与拟南芥功能基因LOX2启动子区域的顺式作用元件结合.生物信息学分析表明,拟南芥TCP蛋白含有非典型的螺旋-环-螺旋(bHLH)结构域;系统进化树表明,AtTCP4属于Ⅱ类TCP蛋白;蛋白三级结构预测表明:转录因子TCP4可以形成同源或异源二聚体.特异性引物扩增获得AtTCP4基因的CDS序列,其开放阅读框(ORF)长为1263 bp.构建原核表达载体pET-28a-AtTCP4并转化到Rosetta(DE3)感受态中,经IPTG诱导、纯化和Western Blot检测证明获得AtTCP4蛋白.EMSA试验验证AtTCP4蛋白能够结合到功能基因LOX2的顺式作用元件.转录因子TCP4结合功能基因LOX2启动子区域,影响植物激素茉莉酸的生物合成,调控植物的生长发育过程.

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来源
《华北农学报》 |2021年第5期|24-28|共5页
作者
雷其冬; 孙旭东; 徐慧妮;
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作者单位

昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明 650500;

中国科学院昆明植物研究所云南昆明 650201;

昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明 650500;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
拟南芥; 转录因子; TCP; 基因克隆; 原核表达; 蛋白纯化;

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