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猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

         

摘要

The emulsified and inactivated porcine epidemic diarrhea virus (PEDV)was used as antigen to prepare the rabbit anti PEDV hyperimmune serum,and the anti PEDV IgG was purified and labeled with biotin.A double sandwich ELISA method for the detection of biotin avidin system of PEDV was established,taking in vitro expression of PEDV S protein as antigen,commercial PEDV monoclonal antibody as capture antibody,biotin labeled IgG as detection antibody.The results showed that the detection limit of the method was 20 ng/μL,and the stability and specificity were better.Twenty-five samples of swine diarrhea were detected,and positive PEDV was detected in 3 samples.The coincidence rate with RT-PCR was 100%.This study provides a new method for the clinical detection of PEDV,and lays a foundation for the study of multiple detection techniques.%以乳化灭活的猪流行性腹泻病毒(PEDV)作为抗原,免疫大白兔,制备兔抗PEDV高免血清,纯化抗PEDV IgG并进行生物素标记.以体外表达的PEDV S蛋白作为抗原,商品化的PEDV单克隆抗体作为捕获抗体,生物素标记的IgG作为检测抗体,建立了检测PEDV的生物素-亲和素系统的双抗夹心ELISA方法.结果表明:该方法最低检测限量为20 ng/μL,且稳定性和特异性较好.对25份临床猪腹泻样品进行检测,3份检出PEDV阳性,与RT-PCR法的符合率为100%.本研究为PEDV临床检测提供了新方法,也为猪腹泻病原的多重检测技术研究奠定了基础.

著录项

  • 来源
    《上海农业学报》 |2017年第1期|134-137|共4页
  • 作者单位

    上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106;

    上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306;

    上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106;

    上海市农业遗传育种重点实验室,上海 201106;

    上海种猪工程技术研究中心,上海 201302;

    上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106;

    上海市农业遗传育种重点实验室,上海 201106;

    上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106;

    上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306;

    上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106;

    上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306;

    上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106;

    上海市农业遗传育种重点实验室,上海 201106;

    上海种猪工程技术研究中心,上海 201302;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 家畜病毒学;
  • 关键词

    猪流行性腹泻病毒检测; 重组S蛋白; 双抗体夹心ELISA;

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