高质量高得率的生物柴油要求植物脂肪酸拥有一个以上的双键,但数目尽可能要少,最好只有一个双键.但是现在绝大多数油料植物的多不饱和脂肪酸含量偏高,如中间锦鸡儿种子中多不饱和脂肪酸含量高达60%,迫切需要改良.以中间锦鸡儿枝、叶和种子为材料,根据Genbank中已登录的fad2基因同源序列,设计兼并性引物,利用PCR方法获得基因片段.在GenBank中Blast(GenBank登录号AY957 394),所得基因片段和同属豆科的Glycine max Gm基因fad2-2a同源性达88%,属于fad2基因编码区中间片断.将所得片段经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121,构建反义表达载体pBI121fad2,并利用农杆菌介导法转入烟草叶片,获得了抗卡那霉素和安苄青霉素的烟草再生植株.采用基因片段特异引物和表达载体pBI121上基因NPTⅡ引物双重检测均呈阳性的确认为烟草转基因植株,分别测定转基因烟草和对照种子脂肪酸.结果表明,与对照烟草比较,转基因烟草种子脂肪酸含量未见明显差异,而亚油酸减少了10.3%.研究结果为进一步进行柠条分子育种,获得高产单不饱和脂肪酸新品种及改造相关生物柴油用木本油料植物提供了科学依据.
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