血吸虫Sj26膜锚定表达DNA疫苗的构建、表达及其免疫原性

杨平; 戴五星; 刘朔捷; 郭萍; 马彦彬; 唐成武; 程继忠

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目的构建含日本血吸虫相对分子质量为26 000的抗原(Sj26GST)基因的膜锚定表达DNA疫苗,观察其免疫BALB/c小鼠后的免疫应答效应.方法用RT-PCR法,以血吸虫成虫RNA为模板,扩增获得Sj26的全长基因.利用重组PCR技术,在Sj26基因的5′端加上编码IL-2的信号肽核苷酸序列,3′端加上编码胎盘碱性磷酸酶的膜锚定序列,然后将其克隆入pIRES载体中,构建一个膜锚定型真核表达质粒pIRES-Sj26.将重组质粒转染HeLa细胞,通过RT-PCR及间接免疫荧光技术检测目的基因的表达.用构建的pIRES-Sj26疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,以ELISA试剂盒检测小鼠血清中的总IgG抗体浓度,脾细胞培养法检测脾淋巴细胞培养上清的干扰素γ(INF-γ)含量,淋巴细胞刺激指数(SI)反映淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测脾细胞CD4/CD8亚群.结果经过酶切鉴定、PCR及测序证实重组质粒pIRES-Sj26构建成功,经转染HeLa细胞及免疫荧光检测证明质粒pIRES-Sj26能在体外进行表达.免疫小鼠后检测结果表明pIRES-Sj26组的血清总IgG抗体浓度、INF-γ的含量明显高于空白对照组和空载体组(均P＜0.01);其脾SI高于空白对照组和空载体组(P＜0.05);CD8+细胞百分比高于空白对照组和空载体组 (均P＜0.05), CD4+细胞百分比没有显著变化(P＞0.05).结论成功构建日本血吸虫膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26, 表达的Sj26蛋白大部分锚定在细胞膜上.pIRES-Sj26疫苗能增强BALB/c 小鼠的免疫应答反应.

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来源
《华中科技大学学报（医学版）》 |2007年第2期|141-144,152|共5页
作者
杨平; 戴五星; 刘朔捷; 郭萍; 马彦彬; 唐成武; 程继忠;
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作者单位

华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系,武汉,430030;

华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系,武汉,430030;

华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系,武汉,430030;

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华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系,武汉,430030;

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正文语种 chi
中图分类医学寄生虫学;
关键词
抗原,血吸虫; Sj26; 疫苗,DNA; 免疫性;

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