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对粉纹夜蛾高毒力cry9Ea基因的克隆及表达

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【目的】从本实验室分离的Bt4菌株中克隆cry9Ea基因,并研究其表达和杀虫活性。【方法】以PCR-RFLP方法鉴定Bt4菌株含有cry9基因,然后以菌株Bt4的质粒为模板,利用全长引物F9EA/R9EA进行PCR扩增全长基因。【结果】将目的片段插入到表达载体pET21b,得到大肠杆菌重组表达质粒pETcry9Ea。转化E.coli BL21(DE3),诱导后表达130kDa的蛋白,再将cry9Ea7基因连接到穿梭载体pSXY422b,电激转化HD73-(cry-),得到工程菌BioHD9Ea7,提取Cry9Ea7晶体蛋白,并进行生物活性测定。生物活性测定结果显示Cry9Ea7蛋白对粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)初孵幼虫具有高毒力,LC50为0.044μg/mL,而对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)初孵幼虫未显示活性。【结论】克隆和表达了一个对粉纹夜蛾高毒力的基因cry9Ea7,并成功构建了工程菌BioHD9Ea7。

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来源
《微生物学报》 |2010年第5期|601-605|共5页
作者
孙永祥; 刘廷辉; 郭巍; 王立光; 孙伟明;
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作者单位

河北农业大学生命科学学院;

保定071001;

河北农业大学植物保护学院;

河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心;

保定071001;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 S476.1;
关键词
苏云金杆菌; cry9Ea7基因; 基因克隆; 基因表达; 杀虫活性;

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