苏云金芽孢杆菌生产菌株溶原性噬菌体pep基因的克隆、表达及功能分析

廖威; 陈维春; 贾艳华; 庞义

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苏云金芽孢杆菌生产菌株溶原性噬菌体pep基因的克隆、表达及功能分析

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溶原性噬菌体的随机爆发是微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)发酵生产的首要危害.[目的]本文的目的就是通过研究B.t生产菌株溶原性噬菌体的遗传背景,以便从分子水平上控制其在生产中的随机爆发.[方法]通过对广东梅州某公司的生产菌株MZ1采用Mitomycin C进行诱导,提取噬菌体颗粒MZTP01的基因组DNA,克隆和表达该噬菌体的pep基因,并进行了功能分析.[结果]诱导获得的溶原性噬菌体MZTP01斑点清晰,直径约1mm,成斑时间12h;从噬菌体基因组DNA双酶切(Hind Ⅲ/EcoR Ⅰ)片段中回收长度为2362bp的D片段(Genbank登录号:AY639599),又从D片段中克隆了长度为1101bp、编码367aa、分子量为47kDa的Pep基因,表达载体M15(pQE30pep)在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中表达获得了47kDDa的清晰表达带,在1h时开始产生蛋白并有逐步上升的趋势;Western blot也在47kDa处得到一条清晰的条带;可溶性分析表明PEP蛋白在重组菌株中是以不可溶的包含体形式存在的,该蛋白的产生明显地抑制了宿主的生长速度;噬菌体PEP氨基酸序列之间的同源性比较表明,噬菌体MZTP01 PEP蛋白与来自E.coli K12噬菌体的PEP蛋白的同源性程度最大.[结论]我们获得了一种新的噬菌体MZTP01,并首次报道了该噬菌体D片段的核苷酸序列及pep基因的功能,试验证明PEP表达蛋白能够水解酪蛋白,其活力相当于0.3mg/mL的胰蛋白酶.

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来源
《微生物学报》 |2008年第4期|459-465|共7页
作者
廖威; 陈维春; 贾艳华; 庞义;
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作者单位

中山大学生命科学学院,有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广州,510275;

广西职业技术学院食品技术系,南宁,530226;

中山大学生命科学学院,有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广州,510275;

广东医学院生化和分子生物研究所,湛江,524023;

中山大学生命科学学院,有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广州,510275;

中山大学生命科学学院,有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广州,510275;

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正文语种 chi
中图分类基因的重组;
关键词
苏云金芽孢杆菌; 溶原性噬菌体; pep基因; 克隆; 功能分析;

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