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基于高通量测序技术的胰腺癌环状RNA差异表达谱分析

         
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目的筛查胰腺癌组织环状RNA(circRNA)差异表达谱并初步分析其潜在功能。方法随机选取4对胰腺癌组织和对应癌旁胰腺组织标本进行高通量测序,按表达量差异倍数>2且P<0.05为筛选标准,筛选差异表达的circRNA。qRT-PCR检测随机选取的5个差异表达的circRNA在20对胰腺癌组织标本中的表达,对测序结果进行验证。对差异表达的circRNA进行GO和KEGG富集分析,并构建top50 circRNA-microRNA互作网络图。进一步分析hsa_circ_0046523与胰腺癌临床病理特征的关系,并通过敲减试验观察其对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果高通量测序共预测出17182个circRNA,在胰腺癌组织中差异表达的circRNA有302个,其中137个表达上调,165个表达下调。qRT-PCR结果显示,与癌旁组织相比,胰腺癌组织中has_circ_0046523、hsa_circ_0004220和hsa_circ_0000690表达水平上调(P<0.05),hsa_circ_0008676和hsa_circ_0004416表达水平下调(P<0.05),与测序结果一致。GO分析提示差异表达的circRNA主要参与底物依赖性细胞迁移、蛋白激酶复合物和细胞骨架蛋白结合等过程。KEGG通路富集分析显示差异表达的circRNA主要参与蛋白消化和吸收通路、ABC转运蛋白通路、癌症中心碳代谢通路以及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢通路等。hsa_circ_0046523表达水平与胰腺癌肿瘤分化程度(P=0.002)、T分期(P=0.006)、淋巴结转移(P=0.011)及TNM分期(P=0.001)密切相关。与HPDE6-C7细胞相比,hsa_circ_0046523在胰腺癌细胞SW1990、Mia PaCa-2、BxPC-3和Capan-2中的表达水平升高(P<0.05)。下调hsa_circ_0046523的表达可以抑制胰腺癌细胞(Mia PaCa-2、BxPC-3)的增殖、迁移及侵袭能力(P<0.05)。结论胰腺癌组织中存在特征性差异表达的circRNA,这些差异表达的circRNA可能参与胰腺癌的发生发展。

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