一种松材线虫醛脱氢酶的基因克隆及其生化性质

李文硕; 王林松; 杜桂彩; 郭群群; 张廷婷; 杨宏; 李荣贵

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一种松材线虫醛脱氢酶的基因克隆及其生化性质

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松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是松萎蔫病的病原,可引起数十种松属树种的毁灭性破坏。通过RT-PCR 成功克隆了松材线虫体内一种醛脱氢酶基因aldh,aldh的长度为1 353 bp,编码451 个氨基酸残基,前期研究表明,杀线剂甲吡唑处理能使aldh表达水平显著上调。序列比对表明,与大多数其他醛脱氢酶中依靠半胱氨酸(Cys)残基发挥催化功能不同,aldh 编码的蛋白质保守的位置是亮氨酸(Leu)残基,但其C-端紧邻Leu残基的是组氨酸残基(His),而不是常见的Leu残基。构建了表达载体pET-15b-aldh并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导aldh在工程菌中实现了高表达,重组醛脱氢酶通过Ni-NTA亲和层析纯化后进行表征。以甲醛为底物的醛脱氢酶Km为27.87 mmol/L,最适pH值为7.5,最适温度为25℃,Fe^(3+)和Ni^(2+)可提高酶活性,Ca^(2+)、Mn^(2+)、Na^(+)和K^(+)可降低酶活性。重组醛脱氢酶对5种醛类化合物显示出不同的催化活性,其中香草醛是其最佳底物。该研究为深入了解醛脱氢酶在松材线虫致病过程中的作用打下了基础,也为新型工业用醛脱氢酶的研究提供了参考。

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来源
《生物技术通报》 |2022年第9期|207-214|共8页
作者
李文硕; 王林松; 杜桂彩; 郭群群; 张廷婷; 杨宏; 李荣贵;
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作者单位

青岛大学生命科学学院;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类动物医学（兽医学）;
关键词
松材线虫; 醛脱氢酶; 纯化; 性质;

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