Ezrin多克隆抗体制作及应用

张宏玲; 万骏; 严飞; 张新胜; 曹威; 陶伟; 黄来强

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构建Ezrin原核重组表达载体pET-28a(+)-ezrin,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导获得Ezrin蛋白,将经镍柱亲和层析纯化后的蛋白分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠(KM),获得抗血清,采用ELISA和Western blotting,免疫荧光测定其效价和特异性.ELISA对抗血清进行效价测定表明抗血清可与抗原发生特异性免疫反应；通过Western blotting对抗血清进行鉴定表明抗血清可以识别几种细胞株内的特异性条带,其相对分子量为82 kD,与预测分子量相符；免疫荧光试验表明抗血清可以识别细胞内的Ezrin蛋白,且定位情况与文献报道相符.最后通过protein G对抗血清进行了纯化.结果表明用该方法制备的Ezrin多克隆抗体有较高的特异性和灵敏度.

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来源
《生物技术通报》 |2013年第1期|129-133|共5页
作者
张宏玲; 万骏; 严飞; 张新胜; 曹威; 陶伟; 黄来强;
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作者单位

清华大学生命科学学院,北京100084;

清华大学深圳研究生院生命与健康学部生物医药研究中心和基因与抗体治疗重点实验室,深圳518055;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
原核表达纯化; Ezrin蛋白; 动物免疫; 抗血清; 抗体鉴定;

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