首页> 中文期刊> 《生物技术通报》 >人源EFA6A蛋白Sec7结构域的克隆表达与纯化

人源EFA6A蛋白Sec7结构域的克隆表达与纯化

         

摘要

作为小GTP酶Arf6的鸟甘酸交换因子(GEF),人EFA6A蛋白主要包含PH和Sec7两个结构域,Sec7是行使GEF功能的核心区域.通过分析Jpred、Uniprot等生物信息学软件的预测结果,从全长1 024 aa中选取的重组Sec7结构域的边界为506-719,共214 aa.以人脑cDNA文库为模板,通过优化PCR程序成功扩增出Sec7基因,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后亚克隆至原核表达载体p28a中,成功构建p28-Sec7重组子,测序结果与NCBI中公布的序列100%吻合.将重组质粒p28-Sec7转化至BL21-Gold(DE3)宿主菌中,终浓度0.3 mmol/L IPTG、16℃、24h诱导表达,重组蛋白经过Ni柱和分子筛两步纯化.试验结果显示,重组Sec7成功表达,性质均一,纯度高于95%,表达量为70 mg/L.

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号