H5N1禽流感病毒HA和NA基因重组腺病毒共表达载体的构建

王青; 胡建和; 郑素玲

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H5N1禽流感病毒HA和NA基因重组腺病毒共表达载体的构建

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利用口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白具有自我裂解的功能,将其作为连接肽构建携带有H5N1亚型AIV HA和NA基因的重组腺病毒表达载体,进而为AIV基因工程疫苗的开发以及相关诊断试剂的开发提供依据.采用融合PCR的方法扩增出含有HSN1 AIV HA-2A-NA的基因,定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中,含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-HA-2A-NA与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-HA-2A-NA,将pAdeasyd-H5经Pac Ⅰ线性化后转染HEK293细胞株包装出含有HA-2A-NA基因的腺病毒pAd-HA-2A-NA.结果表明,构建的含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-HA-2A-NA和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-HA-2A-NA经PCR、双酶切及核苷酸测序测定无误.线性化后的pAdeasy-HA-2A-NA转染HEK293细胞包装成功获得腺病毒pAd-HA-2A-NA载体,经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达.本试验构建的含有AIV H5N1亚型HA-2A-NA基因的重组腺病毒表达载体,将为进一步研究开发基因工程疫苗提供病毒模型.

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来源
《生物技术通报》 |2010年第10期|172-177|共6页
作者
王青; 胡建和; 郑素玲;
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作者单位

河南科技学院动物科学学院,新乡,453003;

河南科技学院动物科学学院,新乡,453003;

河南科技学院动物科学学院,新乡,453003;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂;
关键词
腺病毒载体; AIV H5N1 亚型; HA 和 NA 基因; 载体构建;

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