基于CRISPR/Cas9加工番茄α-Man突变体的构建

张圆圆; 邵冬南; 崔百明

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基于CRISPR/Cas9加工番茄α-Man突变体的构建

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为培育成熟果实软化程度低,货架期长的番茄植株,以加工番茄甘露糖苷酶基因(α-Man)为编辑对象,设计由番茄U6启动子驱动、长21 bp的guide RNA(gRNA)指导hCas9核酸酶,靶向编辑 α-Man的第1个外显子.首先构建基于CRISPR/Cas9系统的植物表达载体,并通过农杆菌介导的遗传转化获得加工番茄转基因株系,然后取转基因番茄叶片基因组DNA,利用限制性内切酶法结合PCR扩增对 α-Man编辑位点附近的DNA片段进行检测及测序分析.结果表明,14株转基因番茄植株有2株检测到突变现象.α-Man突变体TA克隆测序结果显示有2种编辑类型,一种表现为52 bp的缺失突变;另一种表现为单碱基突变.实现了对番茄 α-Man的编辑.

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来源
《生物技术通报》 |2019年第6期|9-15|共7页
作者
张圆圆; 邵冬南; 崔百明;
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作者单位

石河子大学生命科学学院石河子大学农业生物技术重点实验室;

石河子 832003;

石河子大学生命科学学院石河子大学农业生物技术重点实验室;

石河子 832003;

石河子大学生命科学学院石河子大学农业生物技术重点实验室;

石河子 832003;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
加工番茄; CRISPR/Cas9; α-Man; 果实成熟软化;

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