黑曲霉葡萄糖氧化酶基因在毕赤酵母中的表达及产酶条件的优化

廖兆民; 蔡俊; 林建国; 杜馨; 王常高

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黑曲霉葡萄糖氧化酶基因在毕赤酵母中的表达及产酶条件的优化

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从黑曲霉中克隆葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,E.C.1.1.3.4,GOD)基因,使其在毕赤酵母GS115中高效表达,为葡萄糖氧化酶的工业化生产提供理论依据.通过设计简并引物,扩增GOD,将该基因连接到质粒pPICZαA上并在毕赤酵母中表达,依据摇瓶水平优化最佳诱导产酶条件,在30 L发酵罐中进行发酵放大试验,共表达His4,采用DO-STAT的甲醇流加策略进行高密度发酵.结果表明,重组毕赤酵母GS115/pPICZαA-GOD在摇瓶水平经0.5％甲醇诱导96h,发酵液上清GOD酶活达到32.25 U/mL.经优化得到最佳发酵条件为:在30°C、pH 6.0、250 r/min条件下,发酵液体积1％的甲醇诱导96 h,GOD酶活达到50.1 U/mL,相比初始发酵,酶活提高了 55.3％.经30 L发酵罐放大试验,GOD酶活达到307.52 U/mL,提高了 5.1倍.共表达His4使细胞湿重提高了 72.5％,GOD酶活达到了 461 U/mL,相比初始重组酵母提高了 50.2％.SDS-PAGE分析发现GOD分子量约90 kD.重组GOD能在毕赤酵母中高效表达,且表达产物纯度高,杂蛋白少,有利于纯化.

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来源
《生物技术通报》 |2021年第6期|97-107|共11页
作者
廖兆民; 蔡俊; 林建国; 杜馨; 王常高;
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作者单位

湖北工业大学生物工程与食品学院武汉430068;

湖北工业大学生物工程与食品学院武汉430068;

湖北工业大学生物工程与食品学院工业微生物湖北省重点实验室武汉430068;

湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室武汉430068;

湖北工业大学生物工程与食品学院武汉430068;

湖北工业大学生物工程与食品学院武汉430068;

湖北工业大学生物工程与食品学院武汉430068;

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正文语种 chi
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关键词
毕赤酵母; 葡萄糖氧化酶; 异源表达; 产酶优化;

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