MFG-E8作为外泌体载体蛋白的作用与功能

黎智康; 刘晨雪璇; 谭楚敏; 熊盛; 谢秋玲

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MFG-E8作为外泌体载体蛋白的作用与功能

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构建MFG-E8全长和截短体的重组质粒,分析各截短体蛋白能否将目的蛋白带到外泌体上并确定其位置,以探讨MFG-E8各结构域功能及其作为外泌体上载体蛋白的效率。利用PCR扩增出带有信号肽的MFG-E8及其截短体基因,与EGFP基因连接,构建7种重组质粒。之后PEI介导瞬转HEK293F细胞进行表达,利用EGFP的荧光,通过Western blot和激光共聚焦显微镜检测蛋白表达情况及其在胞内的位置。同时提取转染细胞分泌的外泌体,通过Western blot和电镜检测重组蛋白在外泌体中的情况。最后将含有重组蛋白的外泌体转染293T细胞,荧光显微镜观察外泌体将重组蛋白带入受体细胞中的情况。结果表明,成功构建MFG-E8全长及截短体重组质粒并在HEK293F细胞中表达,各重组蛋白在胞内均有表达,其中EGF-L表达量最高,C2最低,细胞上清中只能检测到EGF-L、C1、EC1的表达。转染细胞分泌的外泌体只检测到MFG-E8、EC1和C1C2三种蛋白。含有这3种蛋白的外泌体转染HEK293T细胞,3组细胞均有荧光,其中MFG-E8-EGFP的外泌体效果最好。MFG-E8能够作为蛋白载体将目的蛋白带到外泌体膜上,其C1、C2结构域对该过程至关重要,EGF-L的存在可以促进蛋白表达。

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来源
《生物技术通报》 |2022年第4期|288-294|共7页
作者
黎智康; 刘晨雪璇; 谭楚敏; 熊盛; 谢秋玲;
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作者单位

暨南大学生命科学技术学院;

基因工程药物国家工程研究中心;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类肿瘤学;
关键词
乳脂肪球表皮生长因子Ⅷ(MFG-E8); 截短体; 外泌体; 载体蛋白; 结构域功能;

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