基于Overlap PCR方法进行猪伪狂犬病毒TK基因缺失载体的构建、鉴定及生物学分析

毕研丽; 郭广君; 吕素芳; 魏凤; 沈志强

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基于Overlap PCR方法进行猪伪狂犬病毒TK基因缺失载体的构建、鉴定及生物学分析

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构建伪狂犬病毒TK基因缺失载体,在BHK-21细胞中表达,为研究TK基因生物学活性及其基因工程疫苗研制提供科学依据.根据伪狂犬病病毒sA株TK基因序列,设计引物,通过Overlap PCR扩增到长约1814bp的TK基因,与PMDl8-T载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pMD-TK与表达载体pBluescript SK(+)分别用限制性内切酶BamH I,HindIII酶切后,定向亚克隆;重组表达质粒pBTK经PCR、酶切鉴定后,阳性质粒进行测序.利用脂质体介导阳性重组质粒pBTK转染BHK.21细胞,通过噬斑纯化获得获得重组病毒PRV/TK-.该重组病毒在体外传15代后仍具有良好的遗传稳定性,应用PCR技术可从体外反复传代的阳性细胞基因组中扩增到TK基因,其TCID50毒价是5.75.本实验为PRV基因功能的研究及PRV基因缺失苗的研究提供了基础.

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来源
《中国动物检疫》 |2011年第2期|40-43|共4页
作者
毕研丽; 郭广君; 吕素芳; 魏凤; 沈志强;
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作者单位

山东绿都生物科技有限公司,山东滨州,256600;

山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州,256600;

山东绿都生物科技有限公司,山东滨州,256600;

山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州,256600;

山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州,256600;

山东绿都生物科技有限公司,山东滨州,256600;

山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州,256600;

山东绿都生物科技有限公司,山东滨州,256600;

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正文语种 chi
中图分类 S852.659.1;
关键词
伪狂犬病病毒; TK基因; Overlap PCR; 转移载体;

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